刘永庆 王成宏 童钟

(合肥市第一人民医院肝胆外科，安徽 合肥 230601)

肝癌是世界范围内高发生率(第五)高死亡率(第三)的癌症之一[1-2]。肝炎病毒的感染是肝癌发生的主要因素(约占80%)3。其他因素，如酒精摄入，肥胖，肝硬化，吸烟甚至是糖尿病皆是肝癌发生的诱导因[4-8]。此外，基因突变及染色体异常也在肝癌发生发展中占据主导地位[9-12]。微小RNA作为一种小的非编码核糖核酸可以通过碱基互补配对与靶基因结合，进而沉默靶RNA或者抑制RNA转录后表达[13]。其中miR-143参与多种癌症的发生发展。本研究旨在探讨miR-143在肝癌组织中的表达情况，以及进一步敲低miR-143后，通过调节SHP2-ERK1/2信号通路来升高肝癌细胞中肝细胞的比例，从而加重肝癌细胞的恶性程度的调控机制。

1 材料与方法

1.1材料 20例肝癌组织样本以及正常的20份肝组织来源于安徽省合肥市滨湖医院，所有涉及人类参与者的操作程序都符合合肥市滨湖医院伦理委员会要求，且皆获得参与此研究涉及的个体的知情同意。人类肝癌细胞HepG2和正常人肝上皮细胞HL02购于美国ATCC细胞库，人肝癌细胞系SMMC-7702细胞系购于上海慧颖生物科技有限公司。miRNA-143的相关引物购于invitrogen公司。肝癌组织以及肝癌细胞的miRNA提取是通过大连Takara公司的miRvana miRNA 试剂盒。miR-143 inhibitor以及miR-143-mimic购买于上海汉恒公司。Transwell 小室购于康宁公司。流式抗体CD133-APC购于BD pharmingen公司，乙醛脱氢酶活性检测试剂盒购于北京索莱宝有限公司。

1.2方法

1.2.1细胞培养 HepG2，HL02以及SMMC-7702细胞皆采用相同的细胞培养方式进行无菌培养，即细胞培养所用培养基为DMEM加10%的胎牛血清和1%的双抗(青霉素与链霉素)。……