王泽洲，吴俊清，章健，吴冠英，陈弟诗，贺冬梅

（1.四川省动物疫病预防控制中心，四川 成都 610041；2.成都微瑞生物科技有限公司，四川 成都 611731）

由于H7N9亚型禽流感对人具有传染性和致死率，可能对公共卫生安全和社会稳定造成较大的危害和影响，因此对该病的早期诊断、监测非常重要。本研究应用镧系元素作荧光标记物，研制了一种既简单方便、快捷，又准确、特异、敏感的禽流感高敏荧光免疫分析快速检测试剂盒（LFICA）。现将初步研究结果报告如下:

1 材料和方法

1.1 材料禽流感（AI）通用型单抗，禽流感H7亚型单抗，羊抗兔IgG抗体、兔IgG抗体，H9、H7、H5、H3亚型禽流感抗原，新城疫（ND）抗原和鸡传染性支气管炎（IB）抗原等，鸡泄殖腔和咽喉拭子样品由相关合作单位提供。吸水纸、样品垫、硝酸纤维素膜，1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC），N-羟基琥珀酰亚胺，切条机、点膜与喷金膜机，镧系荧光纳米微球和荧光仪，其他试剂均为国产分析纯。制备包被膜、抗体标记微球、双抗体夹心法建立等，均参照说明书或按照相关要求操作。

1.2 荧光免疫分析试纸条的组装在湿度小于30%，温度20～25℃的环境下，把吸水纸、标记物垫和样品垫按顺序粘贴在聚氯乙烯底板上形成微反应体系，然后将其切割成0.5 cm宽，即成试纸条（图1），将试纸条装入卡壳中制成检测卡，装入铝箔袋封存备用。

图1 镧系荧光免疫层析法结构示意图

1.3 标准曲线以标准阳性抗原和阴性样本建立标准曲线。相关阳性抗原和阴性样本由本单位提供。

1.4 特异性试验选取H9、H7、H5、H3亚型禽流感抗原、新城疫抗原等阳性样品，稀释40倍，应用禽流感高敏荧光免疫分析试纸条检测，同时设空白和阴性对照，以确定该方法是否发生交叉反应。……