吕桂云 郭绍贵 张海英 耿丽华 许勇

目的与意义：西瓜枯萎病是由半知菌亚门镰孢属尖孢镰刀菌寄生引起的一种真菌土传病害，是世界范围内导致西瓜产量和品质降低的最严重病害。明确枯萎病菌与寄主植物之间的互作机制，揭示其相互作用的分子机制，可为西瓜抗枯萎病育种和病害防治奠定理论基础。利用绿色荧光蛋白（GFP）作为标记，研究枯萎病菌在西瓜抗、感寄主根系中侵染和定殖动态，从组织学的角度来阐释西瓜与枯萎病菌亲和互作和非亲和互作的差异。

材料与方法：1.以农杆菌AGL1为介导，将带有潮霉素抗性基因pCH-sGFP质粒转化到西瓜枯萎病菌中，成功获得了能稳定持续表达绿色荧光蛋白的枯萎病菌的突变株BEIJING1-sGFP，对转化子进行抗性鉴定表明，组成型表达sGFP的BEIJING1- sGFP不影响枯萎病菌的致病力。2.以抗病品种‘PI 296341-FR（PI）与感病品种‘Black Diamond （BD）为试验材料，种子消毒后催芽，采用浸根法接种病菌。3.在接种后的 6 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d 、8 d取样进行激光共聚焦显微镜观察。

结果与分析：从西瓜枯萎病菌GFP转化株中选出致病力与转化前的野生型FON1在西瓜抗、感鉴别寄主上的表现无明显差异菌株命名为BEIJING1- sGFP，继代培养后的菌体都有稳定而强的荧光信号，但在细胞质中的液泡无荧光信号。通过人工接种，在无菌条件下进行致病力的检测，BEIJING1- sGFP与转化前的野生型FON1在西瓜抗、感鉴别寄主上的表现无明显差异，说明GFP的转化和表达对枯萎病菌的转化株的致病力无明显影响。

用激光共聚焦显微镜观测GFP标记的西瓜枯萎病菌侵染西瓜感病品种‘Black Diamond过程。……