(安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036)

沐璟玮

(安徽师范大学生命科学学院，安徽 芜湖 241000)

李鹏程，姚峰，岳鼎鼎

(安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036)

陈路

(农业农村部华南水产与畜禽饲料重点实验室，广东恒兴饲料实业股份有限公司，广东 湛江 524094)

杨严鸥

(安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036)

在正常的生理代谢过程中，鱼类的细胞内会产生少量活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)，但当遇到各种胁迫时，活性氧自由基则会过量产生[1,2]，这些自由基对生物机体产生一系列损伤，例如引起细胞膜发生脂质过氧化、改变生物膜结构和功能[1～3]等。为了抵抗这种损伤，生物体内进化出了有效的抗氧化系统[4,5]，而营养不足会影响鱼类的抗氧化指标。谢雨欣等[6]研究了饥饿和再投喂对黄颡鱼幼鱼抗氧化能力的影响；Dong等[7]研究了饲料蛋白质不足对黄颡鱼幼鱼抗氧化能力的影响，温度变化也会影响鱼类的抗氧化指标；郭勤单等[4]研究了温度应激对褐牙鲆幼鱼抗氧化能力的影响；彭婷等[5]研究了低温胁迫对尼罗罗非鱼免疫及抗氧化指标的影响；冯广朋等[8]研究了温度对中华鲟幼鱼抗氧化酶活性的影响。但是鱼类在生长过程中往往经历不止一种环境胁迫，例如一些鱼类经历了一段时间的摄食不足后就进入越冬期，在这种情况下，其抗氧化指标如何变化还不太清楚，因此有必要进行研究，以更多地了解胁迫条件下鱼类抗氧化能力的变化。为此，笔者以我国重要的经济养殖鱼类草鱼(Ctenopharynodonidellus)为试验鱼对这一问题进行了探讨。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验饲养设备为循环水养鱼系统。水源为曝气自来水，中央净水系统主要使用沸石、活性炭等净化水质。水族箱单个规格为60cm×60cm×60cm(长×宽×高)，盛水180L，单箱循环水量1.00L/min；罗茨鼓风机接通风管再接散气石对水箱充氧，每隔5min充气2min。试验期间水体总氨氮质量浓度低于(0.12±0.02)mg/L，溶氧量大于6.2mg/L，pH 7.2±0.1，电热棒与空调控制水温(25±1)℃，日光灯8：00～20：00照明。室内配备2台抽湿机抽出水气，维持空气干燥。

试验鱼购自安徽合肥市渔场，为当年鱼种，实验室暂养7d以上。暂养期间所喂饲料与试验饲料为同一种配合饲料，配方参见文献[9]，配制时将原料磨成粉状物，混匀后经饲料机制成粒径1.5mm颗粒，65℃烘干后于-20℃保存。

1.2 试验方法

养殖试验于10月至12月进行。试验设4组，每组4个重复水族箱，共16个水族箱，先将鱼饥饿24h再随机取样称重分箱，每箱30尾鱼。第1组每天投喂，第2、3、4组分别喂6、5、4d后再分别饥饿1、2、3d；4个组分别以S0(对照组)、S1/6、S2/5和S3/4表示。每天上、下午各投过量饲料1次，1.5h后回收残饵。

养殖8周后，将鱼饥饿24h，称重每箱鱼体重，取7尾鱼置于冰盘取肝胰脏，等量混合后-80℃保存以测定抗氧化指标。水温逐渐下降到室内自然水温，经56d越冬(室内自然水温4～9℃)后用上述方法取肝胰脏，保存以测定抗氧化指标。超氧化物歧化酶(SOD)活性、过氧化氢酶(CAT)活性、维生素E(VE)含量和丙二醛(MDA)含量采用南京建成生物工程研究所的试剂盒进行测定，具体测定方法按照试剂盒的说明进行。

1.3 数据分析

描述性统计值用平均值±标准差表示，单因素方差分析(ANOVA)后进行组间差异的多重比较(Duncan’s procedure)。显著性水平设置为α=0.05，统计软件为SPSS 16.0。

2 结果与分析

2.1 不同投喂模式对草鱼终末湿重及干重的影响

试验中无鱼死亡。由表1可知,S1/6和S2/5的终末湿重和干重均与对照组无显著差异(P>0.05)，S3/4则显著低于对照组(P<0.05)。

表1 不同投喂模式对草鱼终末湿重及干重的影响(平均值±标准差)*

注：同列数据上标字母不同表示有显著差异(P<0.05)。

2.2 不同投喂模式对草鱼肝脏抗氧化指标的影响

由表2可知，在越冬前与越冬后，不同饥饿处理对SOD活性都没有显著影响，但越冬前有先下降后再上升的趋势(P>0.05)；CAT活性越冬前均显著高于越冬后，随着饥饿时间增加在不同时间段的变化趋势也不同，越冬前饥饿时间越长则CAT活性越低(P<0.05)，越冬后则CAT活性则显著上升(P<0.05)；MDA与VE含量变化趋势一致，越冬前两者的含量随着饥饿时间延长显著上升后再下降，越冬后则是显著下降再上升(P<0.05);谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活性在越冬前随着饥饿时间增加均显著上升后再下降，越冬后则是显著上升(P<0.05)。

表2 不同投喂模式对草鱼肝脏抗氧化指标的影响

注：同行数据上标小写字母不同表示不同处理组之间有显著差异(P<0.05)；大写字母不同表示同一处理组越冬前后有显著差异。

3 讨论

VE是重要的抗氧化剂，草鱼饲料中添加VE能促进生长，增强机体抗氧化能力[15]，机体内VE蓄积量的增加可抑制不饱和脂肪酸过氧化，使过氧化产物丙二醛含量降低[16]。该研究中，越冬前S1/6和S2/5组的VE含量上升，这可能表明一定的饥饿胁迫能激发VE含量，在CAT酶活性降低时能起到一定的抗氧化作用。

MDA是不饱和脂肪酸过氧化终产物之一，能与蛋白质的游离基作用，导致细胞损伤，其含量的高低能反映机体细胞受自由基攻击的严重程度，因此被当作是一种细胞膜氧化损伤的指示物[17]。本研究中，间歇性饥饿处理导致越冬前3个试验组的MDA含量均显著高于对照组，这说明鱼体处于一定的氧化胁迫状态，对瓦氏黄颡鱼[11]研究也表明，饥饿导致瓦氏黄颡鱼肝脏的MDA含量显著上升。越冬后，对照组、S1/6与S2/5组的MDA含量均显著下降，这可能与鱼体整体的代谢水平下降有关，但S3/4组的MDA显著增加，原因可能是S3/4组的投喂方式对鱼体抗氧化机能损伤过大，越冬导致这种后果表现出来，抗氧化系统不能更为有效地清除鱼体产生的自由基，导致MDA含量上升。

GPX以谷胱甘肽为底物清除H2O2，是一类具有明确酶活性的硒蛋白，它通过催化谷胱甘肽(Glutathione，GSH)为氧化型谷胱甘肽(oxidized glutathione，GSSG)，使有毒的过氧化氢及脂质过氧化物还原为无毒的羟基化合物，从而保护细胞膜结构及功能不受过氧化物损伤及干扰[18,19]。该研究中3个试验组的GPX活性在越冬前后基本都显著高于对照组，应该是环境胁迫的激发所致[19]。

该研究结果显示，养殖投喂阶段结束时，S1/6组和S2/5组的湿重与干重都与对照组无显著差异，而饥饿时间最长S3/4组体重未能赶上对照组，这表明适当的间歇饥饿不会影响草鱼的体重生长，但无论何种间歇饥饿都会导致草鱼肝脏的抗氧化能力下降，经历越冬后，与连续投喂的对照组相比，3个间歇投喂组仍然保持抗氧化应激状态。