夏玲 梁昕景 王学林 杨小锋

摘要：【目的】优化甜瓜半粒干种子DNA提取方法，为甜瓜相关分子研究提供技术支持。【方法】以甜瓜半粒干种子为材料，比较改良CTAB法、SDS法、高盐低pH法和尿素法4种提取方法的DNA提取效果，并对改良CTAB法中的提取液CTAB浓度、裂解时间、苯酚抽提次数等进行优化，以琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分别检测DNA的质量和纯度。最后通过SSR分析验证优化后改良CTAB法提取DNA的效果。【结果】4种提取方法中，改良CTAB法提取的DNA提取率最高，且DNA质量和纯度均高于其他提取方法。优化得到改良CTAB法的最佳提取条件为：提取液CTAB浓度2%，裂解时间20 min，苯酚抽提1次[先用苯酚/氯仿/異戊醇（25∶24∶1）抽提1次，再用氯仿/异戊醇（24∶1）抽提 1次]。在此条件下，提取的甜瓜半粒干种子DNA质量和纯度较好，以此为模板进行SSR分子标记分析时，电泳条带稳定、清晰，基本无杂带，可清楚区分品种间的差异。【结论】优化后的改良CTAB法提取甜瓜半粒干种子DNA效果较好，可满足甜瓜种子分子标记和遗传多样性分析等分子实验需求。

关键词： 甜瓜;干种子;DNA提取;CTAB法;优化

0 引言

【研究意义】甜瓜属于葫芦科（Cucurbitaceae）黄瓜属（Cucumis）一年生草本植物，是我国重要的经济作物之一。近年来，随着分子育种技术的发展，甜瓜分子育种日益受到广大研究者的关注。DNA提取是分子育种和分子生物学研究的基础，其质量和纯度对要求较高的分子实验具有重要影响（王振东等，2008;陈汝等，2017）。同时，高质量的DNA是基因克隆及SRAP、RAPD、AFLP等分子标记技术的前提条件。因此，优化DNA提取方法对提高研究结果的准确性具有重要意义。……