张硕 王磊

摘要：本文通过多年的实践经验，采用了变波长超高效液相色谱法，充分利用每种着色剂最大可见吸收波长，在检测过程中变化波长进行测定，避免了单一波长下繁琐的前处理，减少提取过程的损失，并且避免杂质在紫外区对样品测定的干扰，保持基线平稳，相应的提高了几种色素的灵敏度。

关键词：着色剂;高效液相色谱法

合成着色剂是为了赋予或改善食品色泽而添加到食品中的物质，它不是食品的成分，在着色剂合成中可能伴有其他副产品而造成污染，特别是早期使用的合成着色剂很多发现具有致癌性，因此世界各国对食用合成着色剂都严格控制。目前，我国允许使用的安全性较高的只有8种。对合成着色剂的检测通常采用高效液相色谱法。

《检测和校准实验室能力的通用要求》规定，检测实验室应开展测量不确定度评定工作，当检测结果临近临界值时，测量不确定度分析评定是检测工作的重要技术组成部分。我们采用了变波长超高效液相色谱法，充分利用每种着色剂最大可见吸收波长，在检测过程中变化波长进行测定，避免了单一波长下繁琐的前处理，减少提取过程的损失，并且避免杂质在紫外区对样品测定的干扰，保持基线平稳，相应的提高了几种色素的灵敏度。同时，超高效液相色谱大大缩短了分析时间，节约了成本。

一、材料与方法

（一）仪器

ACQUITY iJPLC超高效液相色谱系统

（二）色谱条件

色谱柱;ACQUITY UPLCBEH C柱，2.1×50mm，1.7μm;流动相：甲醇（A），0.02mol/L乙酸铵（B）;流速：0.2ml/min;进样量：3μL;柱温：30℃;梯度洗脱程序见表1。

（三）样品测定

均匀称取样品10g，用柠檬酸或稀氨水将样品调节到pH=6-7左右，加水定容至50.0mL，经0.22μm滤膜过滤上机。根据保留时间定性，峰面积定量，以峰面积對浓度作标准曲线，计算回归方程，外标法定量。

二、结果与讨论

（一）流动相的选择

采用梯度洗脱，通过试验调整流动相的比例，最终确定梯度洗脱条件（见表1），我们可以发现各峰分离完全，且峰形良好，分析时间短。

（二）测定波长的选择

采用ACQUITY UPLC测定样品时可以设定检测波长程序，使仪器在不同时刻用不同波长测定样品。经过反复测定发现，这几种合成着色剂的保留时间稳定、重现性好，因此可以在每种着色剂出峰的时间将波长设定为其最大可见吸收波长。国标采用单一的254nm进行检测，但在此波长下有吸收的化学组分很多，会形成大量干扰峰影响着色剂的检测。采用每一种着色剂的最大可见吸收波长进行检测，无色成分没有吸收，就可以避免这个问题，同时提高灵敏度、简化前处理过程。通过对5种合成着色剂的吸收波长进行扫描确定最大吸收波长：柠檬黄428nm、苋菜红520nm、胭脂红509nm、日落黄483nm、赤藓红528nm。根据各种着色剂的保留时间及最大吸收波长确定波长变化程序见表2。

（三）线性范围及检出限

在1.0～100.0mg/L的浓度范围内响应值与合成着色剂的浓度成良好的线性关系。以Y表示浓度，X表示峰面积得到线性方程及相关系数见表3。

（四）加标回收率试验

在样品中分别加入10mg/L和20mg/L的着色刘混标，依本法测定，计算回收率，结果表明回收率良好。（见表4）

（五）精密度试验

对同一加标样品连续测定（n=6），测得RSD值分别为柠檬黄1.01%、苋菜红1.31%、胭脂红1.24%、日落黄1.12%、赤藓红2.05%。

三、结语

笔者提出的方法分离效果好、灵敏度高、干扰小、处理简单，方法线性范围宽，精密度准确度均取得满意的效果，对葡萄酒的检测很有实用价值，值得进一步推广。

参考文献：

[1]周小新，周红.离子色谱法测定水中澳酸根离子含量不确定度评价[J].职业与健康，2009，25（17）.

[2]杜淑霞.高效液相色谱法测定乳饮料中安赛蜜含量的不确定度评定[J].食品研究与开发，2010，31（2）.

[3]刘燕，陈国利，彭新凯，等.气相色谱法测定果冻中甜蜜素结果不确定度评定[J].食品与机械，2008，24（2）.