张艳艳 黄玉舟 李丽 韦石 赵国帅

摘 要：本试验通过较为简单的前处理，并利用HLB净化柱进行快速处理饲料样品，采用液相色谱串联质谱仪对育成牛精补饲料、育成牛浓缩饲料、奶牛预混合饲料等饲料样品中四环素、土霉素的含量进行了测定，并探讨方法的可行性。

关键词：饲料;液相色谱串联质谱;四环素;土霉素

0 引言

四环素和金霉素同属于四环素类抗生素药物，除对革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌以及厌氧菌均有好的抑制作用外，多数立克次体属、支原体属、衣原体属、非典型分枝杆菌属、螺旋体也对四环素类药物十分敏感，是一种高效的广谱抗生素，是十分普遍的生产和临床使用的抗生素类药物。

1 材料与方法

1.1 仪器设备

液相色譜串联质谱仪（美国waters）;天平（Techcomp）;高速离心机（湖南湘仪）;固相萃取仪;HLB净化柱。

1.2 试剂

甲醇（色谱纯，Fisher）;乙腈（色谱纯，Fisher）;盐酸（分析纯，国药）;甲酸（分析纯，国药）;四环素标准品;土霉素标准品;0.4mol/L盐酸溶液：准确称取32.8mL盐酸于1000mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀;0.01mol/L草酸甲醇溶液：准确称取草酸1.26g，用甲醇溶解并定容于1000mL容量瓶中;准确称取适量四环素和土霉素标准品，分别配制成1mg/mL的标准储备液。

1.3 方法

1.3.1 样品前处理

准确称取3.0g样品，置于50mL具塞锥形瓶，加入甲醇10mL，旋涡混匀1min，加入盐酸溶液30mL，涡旋混匀1min，超声20min，移至50离心管中，5000r/min离心10min，取上清液，待净化。

1.3.2 最佳仪器条件的选择

对仪器各项参数进行调试，以确定最佳的仪器测定参数。

色谱条件：C18柱，100mm×2.1mm，粒径1.7μm;柱温，40℃;流动相，乙腈+甲醇+甲酸=18+4+78;进样量，10μL。

质谱条件：离子源，电喷雾离子源;扫描方式，正离子模式;检测方式，多反应监测（MRM）;电喷雾电压，碰撞电压等条件调谐至最优。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

用标准储备液配制成含有四环素和土霉素各0，20，50，100，200，500，1000ng/mL浓度标准工作液，以峰面积为纵坐标，标准工作液的浓度为横坐标绘制标准工作曲线，结果表明其线性关系较好。

2.2 加标回收率结果

从表1，表2，表3可见，3种样品的加标回收率在75.0%～95.6%。表明该方法具有良好的准确性。

3 结论

本试验利用HLB净化柱对育成牛精补饲料、育成牛浓缩饲料和奶牛预混合饲料进行了处理，利用液相色谱串联质谱法对其四环素及土霉素的含量进行了分组多平行测定，结果表明该方法在准确性，重复性、平行性及精密度方面表现良好，多浓度添加回收率均在75.0%～95.6%之间，两种重复性试验中相对标准偏差分别均在3.08%～4.66%和2.75%～4.03%之间，且前处理方法较为简单，适合对大批量饲料样品进行四环素及土霉素的测定。

参考文献：

[1]张天姝，杨慧杰，孙世峰.饲料中4种四环素类药物的检测——高效液相色谱法[J].现代畜牧兽医，2016（10）.