赵 静，李鹏飞，行江水，申国华

（山西省食品药品检验所，山西太原030001）

近年来对蜂胶的质量进行了风险监测，在检测过程中我们对蜂胶进行了有机氯农药残留量（六六六，滴滴涕）的测定。从检测结果看，在我国已禁用将近30年的有机氯农药在蜂胶中仍能检出，虽然超过限制的不多，但有机氯类农药作为一种性质稳定、难以分解的高残留农药，由于它的亲脂性，常常通过积聚在脂肪中而进入食物链，在生态系统中构成恶性循环，对人体神经系统、内分泌系统、生殖系统、免疫功能等造成不可忽视的危害，而现行的检测标准［1］并未将其列入检测标准中。蜂胶被公认为具有调节血脂、血压、血糖等保健功能［2］，被誉为“紫色黄金”，作为蜂胶类保健食品的原料，市场占有很大［3］，对其进行农药残留的检测切实可行，并应延伸到保健食品领域。本文参考文献［4］进行检测，用中华人民共和国农业行业标准［5］及参考文献［6-7］进行确证，结果表明该确证过程数据可靠，方法可行，准确性高。目前蜂胶检测标准为《中国药典》2015年版一部，其已经将重金属［8］的检测收入标准［1］，而作为第一安全指标有机氯农药的残留应引起足够的重视，并建议列入相关国家标准。

1 实验材料

1.1 仪器与试剂

气相色谱仪：岛津GC-2010Plus，附63Ni电子捕获检测器（ECD）、岛津AOC-5000AUTO INJECTOR自动进样器；气质联用仪：Agilent Technologies6890N 5975B InertXL EI/CI MSD；气相色谱柱：DM-1701（30 m×0.25 mm×0.25 m），DM-5（30 m×0.25 mm×0.25 μm），HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；涡旋振荡器（上海比郎仪器有限公司）；超声提取器（昆山市超声仪器有限公司）；低速离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）。

石油醚（60℃～90℃）、二氯甲烷、丙酮、无水硫酸钠、氯化钠均为分析纯（均为国药），浓硫酸、正己烷均为优级纯。六六六（α-六六六、γ-六六六、δ-六六六、β-六六六）、滴滴涕（O.P′-DDT、P.P′-DDE、P.P′-DDD、P.P′-DDT） 标准品均来自农业部环境保护科研监测所，均为农残级（100 μg/mL正己烷溶液）。蜂胶从市场抽样获取。

1.2 色谱条件

1.2.1 DM-1701弹性石英毛细管柱 载气为高纯氮气，流量为2.0 mL/min（恒流方式），进样分流比为 1∶1，进样量为 1 μL，进样口温度为 230 ℃，ECD检测器温度为300℃。柱升温程序为：初始温度100℃，以10℃/min升至220℃，再以8℃/min升至250℃，保持10 min。

1.2.2 DM-5弹性石英毛细管柱 载气为高纯氮气，流量为0.8 mL/min（恒流方式），进样分流比为1∶1，进样量为 1 μL，进样口温度为 280 ℃，ECD检测器温度为300℃。柱升温程序为：初始温度90℃，保持1 min；以40℃/min升至170℃，再以2.3℃/min升至230℃，保持17 min；最后以40℃/min升至280℃，保持5 min。

1.2.3 HP-5ms弹性石英毛细管质谱柱 载气为高纯氦气，流量为0.8 mL/min（恒流方式），不分流进样，进样量为1 μL，进样口温度为280℃。柱升温程序为：初始温度90℃，保持1 min；以40℃/min升至170℃，再以2.3℃/min升至230℃，保持17 min；最后以40℃/min升至280℃，保持5 min。质谱条件：EI离子源，电子能量70 eV，光电倍增器电压350 V，离子源温度230℃，接口温度280℃，扫描质量范围50～350 amu，溶剂延迟5 min，扫描模式采用选择离子监测。

2 方法

2.1 标准品溶液的制备

分别精密吸取上述8种标准品1.0 mL，置同一10 mL量瓶中，用正己烷定容，摇匀，作为单标溶液的储备液，浓度为10 μg/mL的混合标准溶液，再根据各要求稀释所需浓度。

2.2 蜂胶供试品溶液制备

2.2.1 方法1 取本品适量，混匀，研细，取约2 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，加水20 mL浸泡过夜，精密加丙酮40 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量。用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6 g，精密加二氯甲烷30 mL，称定重量，超声15 min，再称定重量。用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将二氯甲烷层迅速移入装有适量无水碳酸钠的100 mL具塞锥形瓶中，放置4 h。精密量取35 mL，于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60～90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净，用石油醚（60～90℃）溶解并转移至10 mL具塞刻度离心管中，加石油醚（60～90℃）精密稀释至5 mL，小心加入硫酸 1 mL，振摇 1 min，离心（3 000 r/min）10 min，取上清液，即得。浓硫酸的加入量可视样品的磺化程度适当地多加，以保证磺化完全。

2.2.2 方法2 取本品适量，混匀，研细，取约2 g，精密称定，精密加入15 mL乙腈，超声处理15 min（250 W，33 KHz），滤过，滤液收集到装有6 g氯化钠的50 mL具塞量筒中，收集滤液10 mL，盖上塞子，剧烈振荡1 min，在室温放置30 min，使乙腈相和水相分层。

2.3 净化

从具塞量筒中精密量取5 mL乙腈溶液置具塞锥形瓶中，旋转蒸发至近干，加入2 mL丙酮，盖上铝铂，待净化。将弗罗里硅土小柱依次用5 mL丙酮+正己烷（10+90）+5 mL正己烷预淋洗，条件化，当洗脱溶剂液面到达柱吸附层表面时，立即倒入上述待净化溶液，用10 mL具塞刻度管接收洗脱液，用10 mL丙酮+正己烷（10+90）分次冲洗烧杯后淋洗弗罗里硅土小柱。将淋洗液置于氮吹仪上，在水浴温度50℃条件下，氮吹蒸发至小于5 mL，用正己烷定容至5 mL，摇匀，即得。

3 结果

3.1 不同提取方法测定结果

采用“2.2.1”制备蜂胶供试品溶液，用“1.2.1”色谱条件进行测定，结果未检出六六六、检出滴滴涕（见表 1，见图 1），再用“2.2.2”制备的蜂胶供试液，用“1.2.1”色谱条件进行测定，结果未检出六六六，但检出滴滴涕。

3.2 验证结果

采用“2.2及2.2.2”制备蜂胶供试品溶液，用“1.2.2”色谱条件进行验证，结果均未检出六六六，而均检出滴滴涕（见表2，图2）。

通过以上数据滴滴涕的量为0.39 mg/kg，而我国规定的总滴滴涕的绿色行业标准的规定为≤0.10 mg/kg，超出限度近4倍。

3.3 GC-MS定性确证

采用“2.2.1”制备蜂胶供试品溶液，用“1.2.3”色谱条件进行质谱确证，通过质谱结果得出，供试品质谱中在与滴滴涕（4个组分）相应保留时间处检出相应的质谱峰，且质谱图与对照品一致（见图3）。

表1 不同提取方法测定结果

表2 验证结果

图1 蜂胶粗筛品色谱图

（1.P.P′-DDE；2.P.P′-DDD；3.O.P′-DDT；4.P.P′-DDT）（前面4个峰为六六六的色谱峰）

图3 标准品与供试品的质谱确证图

4 方法考察

4.1 线性关系

精密量取“2.1”项下混合标准品溶液适量，分别稀释成0.001 mg/mL～0.2 mg/mL的梯度标准品溶液，测定色谱峰面积，以浓度为横坐标，积峰面积（四组分峰面积之和）为纵坐标，求回归方程，得Y=773 549X+20 496，r2=0.997，表明在 0.001～0.2 mg/mL范围内呈线性关系。

4.2 精密度试验

精密量取“2.1”项下标准品溶液（0.01 mg/mL），重复进样6次，RSD为1.6%，表明仪器精密度良好。

4.3 重复性试验

取蜂胶2 g，共取6份，照“2.2.1”制成供试品溶液，含量为0.39 mg/g（作为准确度实验样品），RSD为2.5%。

4.4 定量限及检出限（以P.P′-DDE计）

以信噪比3倍为检出限最低响应值，计算检出限为0.000 25 μg/g；以信噪比10倍为定量限最低响应值，计算定量限为0.000 75 μg/mL。

4.5 稳定性试验

取供试品溶液，在制备后每间隔2 h采集其峰面积，以滴滴涕的峰面积之和计算，结果表明供试品溶液在48 h内保持稳定。

4.6 准确度考察

选用梯度加样回收法，精密称取蜂胶样品1 g，精密称定9份，分别精密加入浓度为1 mg/mL的滴滴涕混合标准品溶液0.08 mL、0.1 mL、0.12 mL各3份，照“2.2.1”同法制成回收供试品溶液，计算回收率，平均回收率为90.5%，RSD为2.6%。

5 讨论

蜂胶是老少病弱皆宜的营养品，越来越被消费者大量使用，也是传统的消费商品。由于蜜蜂在采蜜过程中采集了被农药污染的花粉或药农使用了有机氯农药，抑或日益加剧的环境污染使水源、空气、土壤以及蜜粉植物所载的有害物质增加，导致蜂胶中有机氯残留，给蜂胶产品质量安全带来隐患。

由于蜂胶的原料来源比较复杂，无法确定其准确源头，故无法从源头上采取相应补救预防措施；由于蜂胶及其中药材的种植户保健品品种繁多，没有统一的标准，且所有涉及蜂胶及其保健品的标准中均未将有机氯残留的检测列入，存在很大的缺陷。基于上述情况分析，建议有关部门除进一步加强对蜂胶产品有机氯农药残留的监督及检测外，还应在蜂胶及其保健品蜂胶品种中将有机氯的检测列入其中，以保障消费者的健康安全。