翟连锁，李琳，赵桂芳

（济南市济阳区人民医院，山东 济南 251400）

骨具有强大的修复、再生功能，在骨折愈合过程中，成骨细胞主要合成骨基质，起着非常重要的作用。TNF-α、IL-6等细胞因子具有多种生物学功能，在骨折愈合中是很强的骨吸收刺激因子，可以促使破骨细胞分化形成。此外，有大量研究显示，TNF-α、IL-6会抑制成骨细胞，进而影响骨折的愈合，但是其确切机制还未研究清楚。串珠素（也叫基底膜蛋白多糖）可影响细胞和基质间的粘附，在软骨发育、血管生成中起着非常重要的作用，有研究显示串珠素还可促进神经纤维的修复。在骨折愈合时，成骨细胞会表达一定的串珠素，串珠素有利于骨折的愈合[1]。本次研究以期通过研究一定浓度的TNF-α、IL-6对体外培养胎鼠成骨细胞中串珠素mRNA表达的影响，找出一种抑制成骨细胞活动的机制，加以干预，促进骨折愈合的治疗。

1 材料与方法

1.1 实验材料 实验动物：10只新生SD大鼠（24 h）。实验试剂：DMEM培养基、胎牛血清、RT-PCR试剂盒、0.25%胰蛋白酶等。实验仪器：CO2培养箱、酶标仪、PCR仪等。

1.2 实验方法 通过酶消化方法提取胎鼠颅盖骨成骨细胞，并进行传代培养。在6孔培养板中，以105/mL密度接种传代培养的第3代成骨细胞，每孔100 mL细胞悬液，在37oC下培养24 h。将细胞分为3组（6孔/组）：A组加入等量细胞培养液；B组加入10 ng/mL TNF-α；C组加入100 ng/mL IL-6。在24 h、48 h、72 h时，收集每孔细胞，根据RT-PCR试剂盒说明书中步骤提取总RNA，使用特异性引物进行RNA的反转录，最后进行琼脂糖凝胶电泳检测，并通过Quantity one软件测定扩增条带的灰度值，计算灰度比值。……