受miRNA-205调控的重组柯萨奇病毒B3的构建及其复制
2019-08-30戴潇逸钟江
戴潇逸, 钟江
复旦大学生命科学学院微生物学与微生物工程系, 上海 200438
柯萨奇病毒B3 (coxsackievirus B3，CVB3) 属细小RNA病毒科(picornaviridae)肠病毒属(enterovirus)，基因组为一条长7.4 kb的单股正链RNA。CVB3通常引发轻症感染，但作为病毒性心脏病的主要病原体[1-2]，可引发病毒性心肌炎和扩张型心肌病，严重时甚至会导致病人猝死。开发低致病性的毒株对于制备减毒活疫苗有重要意义[3]。另外，有研究将CVB3用于肿瘤治疗。如何使该病毒具有肿瘤细胞靶向性，也是一项重要的课题[4]。
microRNAs (miRNAs)是一类非编码小RNA，种类众多，在调控真核生物发育、免疫、肿瘤形成等方面有重要作用。它通过结合靶序列引发目标mRNA的降解或抑制其翻译，从而在转录后水平上调控基因表达。利用miRNA特异性降解目标RNA的特点，在病毒基因组中加入特定miRNA的靶序列，就可以限制病毒在高水平表达该种miRNA的细胞中的复制。He等[5]利用miRNA靶序列限制CVB3对心肌细胞的趋向性，降低了野生型CVB3的致病力。
人类miRNA hsa-miRNA-205(包括miR-205-3p和miR-205-5p，简称为miR-205)参与上皮细胞分化、迁移和凋亡[6-8]。有研究表明miR-205在人宫颈癌细胞系HeLa细胞中低表达[9-10]，而在人非小细胞肺癌细胞系A549 细胞中高表达[11-12]。本实验构建了在CVB3基因组编码区含有多拷贝miR-205靶序列的重组病毒v205T。实验显示重组病毒在HeLa和A549细胞系中的复制呈现明显差异，一系列小RNA转染细胞实验的结果表明病毒复制的差异由miR-205引起，证实了使用miR-205靶点改造CVB3的可行性。
1 材料和方法
1.1 细胞和培养基
HeLa、A549细胞均采用含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 U/mL链霉素的DMEM高糖培养液培养，培养条件为37 ℃、5% CO2。
