葛鸿

【摘要】 目的：對比淋巴细胞主动免疫和传统保胎治疗不明原因复发性流产的临床效果。方法：选取2016年12月-2018年1月到本院接受治疗的不明原因复发性流产患者90例，按照随机数字表法分为对照组与研究组，各45例。对照组由本院使用传统保胎方法进行治疗，由于本院医疗条件的局限性，研究组患者送至其他医院进行淋巴细胞主动免疫法治疗，由本院进行相关研究数据提取。对比两组患者妊娠结果、免疫抗体水平以及IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平。结果：研究组患者妊娠成功率显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组患者免疫抗体细胞因子水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，研究组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+免疫抗体因子水平均高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。治疗前，两组患者Th1/Th2、IFN-γ、IL-4水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，研究组Th1/Th2、IFN-γ水平均低于对照组，IL-4水平高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：对不明原因复发性流产的患者进行淋巴细胞主动免疫治疗，其治疗效果较传统保胎好，安全可靠，妊娠成功率高，同时，还可调节患者免疫抗体水平以及IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平，临床应用价值较高，值得推广。

【关键词】 淋巴细胞; 主动免疫; 传统保胎治疗; 不明原因; 复发性流产

【Abstract】 Objective：To compare the clinical effects of lymphocyte active immunity and traditional fetal preservation in the treatment of unexplained recurrent abortion.Method：90 patients with unexplained recurrent abortion who were admitted to our hospital for treatment from December 2016 to January 2018 were selected，they were divided into control group and study group by random number table method，45 cases in each group.The control group was treated by our hospital with traditional methods of fetal preservation，due to the limitations of our hospitals medical conditions，the patients in the study group were sent to other hospitals for lymphocyte active immunotherapy，and relevant research data were extracted from our hospital.Pregnancy results and immune antibody，IFN-γ，IL-4 and Th1/Th2 levels of the two groups were compared.Result：The pregnancy success rate of the study group was significantly higher than that of the control group，the difference was statistically significant（P<0.05）.Before treatment，there were no significant differences in the levels of immune antibody cytokines between the two groups（P>0.05）;after treatment，the levels of CD3+，CD4+，CD4+/CD8+ in the study group were all higher than those in the control group，and the level of CD8+ was lower than that in the control group，with statistically significant differences（P<0.05）.Before treatment，there were no significant differences in Th1/Th2，IFN-γ，IL-4 levels between the two groups（P>0.05）;after treatment，the levels of Th1/Th2 and IFN-γ in the study group were lower than those in the control group，and the level of IL-4 was higher than that in the control group，with statistically significant differences（P<0.05）.Conclusion：Lymphocyte active immunotherapy for patients with unexplained recurrent abortion has better therapeutic effect than traditional fetal protection，is safe and reliable and the pregnancy success rate is high，at the same time，the immune antibody level，IFN-γ，IL-4 and Th1/Th2 levels of patients can also be adjusted，which has high clinical application value and is worth promoting.

【Key words】 Lymphocytes; Active immunization; Traditional fetal-preservation therapy; Unknown cause; Recurrent abortion

First-authors address：Qingdao Maternal and Infant Hospital Co.，Ltd.，Qingdao 266000，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.14.011

流产的危险度会随着连续流产次数的增加而升高，非外在因素下连续流产2次及以上，即称为复发性流产（RSA）[1]。该病致病因素复杂多样，多为内分泌失调、染色体异常、生殖系统生理结构异常、生殖道感染、免疫缺陷等[2]。其中45%～50%的流產患者会出现不明原因流产，称为不明原因复发性流产（URSA），为常见妇产科并发症，该病治疗比较棘手，严重危害女性生殖健康[3]。文献[4]研究发现，不明原因复发性流产的主要原因与免疫因素相关，主要是母胎双方存在免疫不适应，根本原因为缺乏封闭抗体，而针对这一因素导致的复发性流产，文献[5]提出“淋巴细胞主动免疫”的治疗方案，本研究将该治疗方案应用于临床，效果良好，现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年12月-2018年1月到本院接受治疗的不明原因复发性流产患者90例，按照随机数字表法将患者分为对照组和研究组，各45例。纳入标准：（1）患者均为不明原因反复性流产;（2）完善封闭抗体检查，检查结果显示为阴性;（3）自然流产次数为2次及以上;（4）不存在家族遗传史，夫妇染色体均无异常;（5）均完善HIV、梅毒、肝炎等检查，结果显示为阴性;（6）生殖道病菌检查为阴性;（7）患者内分泌系统及血糖水平等正常。排除标准：（1）患者生殖道存在畸形或者存在解剖学异常;（2）本研究所涉及药物或治疗方法存在禁忌的患者;（3）精神异常，存在交流沟通障碍的患者;（4）心、肝、脾、肺、肾等脏器功能障碍，或者存在造血系统异常;（5）中途退出本研究者;（6）患者治疗前进行过对免疫功能造成影响的相关治疗。患者及其家属均悉知本研究内容，表示同意参与，并签署了知情同意书。本院伦理委员会对本次研究进行了审核批准。

1.2 方法

1.2.1 对照组 患者进行传统保胎疗法，即黄体酮加人绒毛膜促性腺激素（hCG）治疗。实施黄体支持，B超监测卵泡发育状况，指导同房[6]。患者排卵后应用hCG，剂量为2 000 U/d，持续用药

3 d，黄体酮（生产厂家：湖北葛店人福药业，批准文号：国药准字H20066109）剂量为20 mg/d，治疗7 d;妊娠后持续进行hCG治疗，剂量同上，直至孕12周[7]。

1.2.2 研究组 使用淋巴细胞主动免疫法进行治疗，方法：排除供血者传染性疾病，之后采集供血者20 mL外周静脉血，加入肝素钠进行血液抗凝，离心后进行淋巴细胞提取，将细胞密度调整为1×107/mL，与2 mL 0.9%氯化钠注射液混合稀释[8]。将稀释好的淋巴细胞注射于左前臂，每边3点[9]。皮下首次注射淋巴细胞悬浊液后，需要观察30 min[10]。2～3周注射治疗1次，每疗程注射4～6次，一个疗程后进行封闭抗体复查，检查结果显示阳性时，在3～5个月内妊娠。妊娠确诊后，加强淋巴细胞主动免疫治疗一疗程，即至妊娠15～16周[11]。对于转阳后6个月内还未妊娠者，需要巩固淋巴细胞主动免疫治疗，频率为每8～10周一次，避免封闭抗体转阴。对封闭抗体阴性者进行复查，加强淋巴细胞主动免疫治疗治疗2次，未出现转阴者可进行备孕[12]。

1.3 观察指标与评价标准 （1）对比两组患者妊娠结果，妊娠成功评价标准：已经足月分娩健康正常的活体婴儿;妊娠时间大于28周，经B超检查显示宫内活胎，胎儿、羊水、胎盘无异常表现。（2）对比两组患者免疫抗体因子水平，治疗前后采集患者晨腹外周静脉血5 mL，进行高速离心分离血清，将CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+等免疫抗体因子水平用免疫荧光法依据操作指示进行检测。试剂盒由武汉博士德生物科技公司提供。（3）对比两组患者IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平，采集患者5 mL肘静脉血，用购自上海精华生物公司的淋巴细胞分离液，分离出单个核细胞，应用PBS洗3次，用浓度为10%的小牛血清（由美国Sigma公司提供），浓度调至1×106/mL，与浓度为1%的植物血凝素（购自美国Sigma），于37 ℃环境下静置，孵箱培养68 h，之后进行离心分离出上清液，用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测IFN-γ与IL-4因子水平，试剂盒购自深圳晶美生物科技有限公司，操作严格按照说明进行。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组一般资料比较 对照组患者45例，年龄21～39岁，平均（30.2±1.5）岁;流产次数：流产2次14例，流产3次22例，流产4次及以上9例。研究组患者45例，年龄22～40岁，平均（30.6±1.4）岁;流产次数：流产2次14例，流产3次20例，流产4次及以上11例。两组患者基线资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组患者妊娠结果对比 研究组患者足月分娩率、妊娠成功率显著高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 两组患者免疫抗体水平对比 治疗前，两组患者免疫抗体细胞因子水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，研究组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+免疫抗体因子水平均高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.4 两组患者IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平对比 治疗前，两组患者Th1/Th2、IFN-γ、IL-4水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，研究组Th1/Th2、IFN-γ水平均低于对照组，IL-4水平高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05），见表3。

3 讨论

不明原因复发性流产为妊娠期常见并发症，约占生育期女性总数的6%。该病会严重损害患者的身体与心理健康[13]。文献[14]研究证实，该疾病主要与同种免疫、自身免疫等因素相关。机体免疫功能能够处于正常状态，主要依赖于T细胞亚群等各类免疫细胞相互制约协作，机体才会有适度的免疫应答，既可清除异物抗原，又不会对机体组织造成损伤。免疫抗体T细胞具有调节机体免疫的功能，CD3+、CD4+、CD8+等免疫抗体因子对机体免疫功能状态具有重要的检测指标作用，利于对细胞免疫功能的具体状况做出判断，便于治疗方案的制定[15]。成熟的T细胞会对细胞的抗原差异做出判断，相应的分化成为CD4+与CD8+两个T细胞亚群，CD4+为具有辅助功能的细胞，CD8+具有抑制细胞毒性的功能，正常状态下，CD4+/CD8+比值可反映机体免疫平衡状态，比值改变能够反映出免疫力的高低状况和免疫功能的变化情况，其比值越高证明免疫调节功能越好，比值降低说明机体免疫力下降，不良反应发生率也会增加[16]。本研究结果显示，治疗前，两组患者免疫抗体细胞因子水平比较，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，研究组患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+免疫抗体因子水平均高于对照组，CD8+水平低于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。

本研究结果显示，治疗前，两组患者Th1/Th2、IFN-γ、IL-4水平比較，差异均无统计学意义（P>0.05）;治疗后，研究组Th1/Th2、IFN-γ水平均低于对照组，IL-4水平高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。这表明，对不明原因复发性流产患者进行主动免疫治疗后，患者血清中出现Th1、IFN-γ水平降低，Th2、IL-4水平升高，即Th1/Th2比值偏向Th2，充分证明，淋巴细胞主动免疫治疗可以降低Th1型细胞因子水平，升高Th2细胞因子水平，免疫抑制效果良好，诱导母体提升对胚胎的免疫耐受能力，防止胚胎受到母体排斥，成功妊娠[17]。

淋巴细胞主动免疫治疗机制是向计划妊娠的女性注射丈夫或者其他供血者的健康淋巴细胞，使患者免疫系统激活，刺激生产封闭抗体，患者在再次妊娠时，生成的封闭抗体，会对胚胎上的外来抗原进行识别并结合，形成封闭保护作用，保护胚胎正常生长发育[18]。有研究证实，对患者进行淋巴细胞主动免疫治疗后，85%以上的患者会产生封闭抗体，免疫保护胚胎，降低Th1型细胞因子水平，升高Th2型细胞因子水平，诱导Th1型因子转换为Th2型因子，提升母体对胚胎的免疫耐受能力，利于妊娠成功[19]。文献[20]报道显示，患者进行淋巴细胞主动免疫治疗后，妊娠成功率会达到70%～85%。本研究结果显示妊娠成功率达75.6%，与文献[20]报道相符。不明原因复发性患者与Th1/Th2平衡存在一定关系，经现代生殖免疫学资料显示，妊娠属于半同种移植行为，母胎间的相互作用决定了妊娠受的成功率。在避免胎儿受到母体排斥，以及防止入侵过度方面，Th1/Th2型因子平衡状态起到了决定性的作用。相对精准的Th1/Th2型因子平衡可有效维持正常生理妊娠，该平衡失调时会出现妊娠失败并引发妊娠并发症。妊娠的正常表现是一种Th2现象，Th2型因子能够对Th1型因子介导的免疫应答进行抑制，避免胎儿以及滋养层细胞遭受继发性损伤，保障妊娠成功，Th1型因子过度表达，会造成流产。Th1型因子分泌的IFN-γ、IL-2等因子，会对急性排斥、炎症、细胞免疫等反应形成介导。Th2型因子分泌的IL-5、IL-4等因子，会对B淋巴细胞的抗体产生、增殖形成介导，两者相互制约下维持机体免疫平衡。IFN-γ会对杀伤细胞的活化、增殖产生促进作用，而活化的杀伤细胞会对胎盘组织产生损害。除此之外，生殖道生成的刺激因子会促进胚胎发育，而IFN-γ会对刺激因子的产生进行抑制其，直接对滋养层产生损害。IL-4能够促进子宫胎盘细胞的生长分化，还可抑制杀伤细胞在内皮细胞黏附，抑制其聚集分化。免疫学上多以IL-4、IFN-γ作为Th2、Th1的特征性因子，检测IL-4与IFN-γ因水平可以对Th2、Th1的功能状态进行掌握。同时本研究结果显示，研究组患者妊娠成功率显著高于对照组（P<0.05），充分证实不明原因复发性流产临床应用淋巴细胞主动免疫比传统保胎治疗临床效果更为显著。

综上所述，对不明原因复发性流产的患者进行淋巴细胞主动免疫治疗，其治疗效果较传统保胎好，安全可靠，妊娠成功率高，可调节患者免疫抗体水平以及IFN-γ、IL-4、Th1/Th2水平，临床应用价值较高，值得推广。

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（收稿日期：2019-02-27） （本文编辑：张爽）