谢雅梅 张宇

（成都市妇女儿童中心医院产前诊断中心 四川 成都 610091）

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月-2018年6月在成都市妇女儿童中心医院进行地贫基因检查的3295例样本为研究对象，年龄16天-65岁，其中男性1054例，女性2241例。

1.2 仪器与试剂

Luminex液相芯片平台200，PCR仪器（BIO-RAD）

1.3 实验方法

标本基因组DNA提取：按照Qigen试剂盒全血DNA提取试剂盒操作进行。地中海贫血基因检测：1）PCR：同一受检DNA样本分别使用试剂盒的PCR MixA和PCR MixB扩增，反应体系均为25μl反应条件分别为A：37℃ 10min；95℃ 10min；95℃30sec,52℃ 45sec,72℃ 30sec,30个循环；95℃ 30sec，65℃45sec，72℃ 30sec,25个循环；72℃ 5min；4℃保存。B：37℃10min；95℃ 10min；97℃ 20sec，72℃ 2min 50sec,40个循环；72℃ 5min；4℃保存。2）杂交：分别取A和B管PCR产物2.5μl和45μl杂交液杂交，条件95℃5min，60℃15min。3）显色：按照试剂盒要求制备显色工作液，杂交后向每个反应孔中加入25μl显色工作液，混匀后60℃显色7min。4）上机检测，判读结果。具体操作严格按照试剂盒提供说明书进行，且每次实验设置阴阳性质控和空白对照。

2.结果

2016年1 月-2018年6月检测样本3295例，共检测单纯型β地中海贫血基因突变1079例，阳性率32.75%。β地中海贫血基因突变检测出18基因型，其中βCD17/β基因型最常见，检出388例，受检人群发生率11.78%，占β地中海贫血基因突变35.96%。其次是βCD41-42/β和βⅣS-Ⅱ-654/β基因型，分别占25.95%和25.12%。且检出重型β地贫患者纯合子和双重杂合突变基因型共6例，3例与CD17突变有关。具体基因型分布见表。

表 β地中海贫血基因突变类型分布情况

3.讨论

β地中海贫血一般由β珠蛋白基因点突变引起，少数由β珠蛋白基因缺失引起。本实验共检测出17种点突变和1种基因缺失。其中β0/N和β+/N杂合子一般无症状或者表现为轻度地中海贫血。而双重杂合子β+/β0和纯合子β0/β0，β+/β+一般表现为重型地中海贫血。β地中海贫血基因突变存在明显的地域性，在广东，广西，海南地区以βCD41-42/β最为多见[1-3]，福建地区以βⅣS-Ⅱ-654/β最为多见[4]。而本实验以βCD17/β最为多见，与学者报道贵州地区β地中海贫血基因突变分布情况相同[5]，且检出重型β地贫患者纯合子和双重杂合突变基因型共6例，3例与CD17突变有关。因此对于β地中海贫血筛查意义宣传极其重要,增强携带者的高危夫妇筛查和宣传教育，对于预防和避免重型β地中海贫血患儿出生，减少社会和家庭负担有重要指导意义。

但本研究样本主要来源于成都及其周边地区人群，不能全部代表四川的总体基因分布，后期还需要进一步收集检测，为四川提供地中海贫血基因分布数据，宣传优生优育和进行产前筛查措施。