邓绍友，李 丽，杨仁华，刘 光，刘 韬

（1.云南省执业药师注册中心，云南 昆明 650106；2.昆明医科大学第三附属医院 药剂科，云南 昆明 650118；3.医科大学药学院/云南省天然药物药理重点实验室，云南 昆明 650500；4.红河卫生职业学院 药学系，云南 红河 661100）

儿科人群是临床用药风险评估中的敏感人群，属于特殊群体。美国FDA强调由于幼龄动物试验可检出潜在的、可能与人体安全性相关的危害，临床使用儿童人群的年龄和治疗期限，以及从成年动物试验和成年患者使用中得到的安全性数据，在儿科患者开始短期、多次给药的有效性和安全性临床试验之前应考虑获得适当的幼龄动物非临床安全性评价的研究结果[1]，完成幼龄动物试验[2，3]。

湿疹(chronic eczema)是皮肤科临床常见的一组变态反应性皮肤病，主要包括变应性接触性皮炎、湿疹和特应性皮炎，多认为由机体内、外因共同作用引起，反复发作[4，5]。目前的治疗方法西医多采用查找并消除过敏源、脱敏疗法和H1受体拮抗剂、糖皮质激素等非特异性药物治疗、中药、抗菌药等进行局部或全身药物治疗。

七参连湿疹膏具有清热燥湿、活血消肿、祛风止痒之功效，已经上市用于治疗成人湿疹，对因风湿热毒瘀阻所引起的湿疹临床疗效肯定。现拟经皮肤涂抹治疗婴幼儿湿疹，因此，本文按照《中药、天然药物刺激和溶血性研究的技术指导原则》[6]、《中药、天然药免疫原性（过敏、光敏反应） 研究的技术指导原则》[7]进行幼龄家兔皮肤刺激性和幼龄豚鼠主动皮肤过敏试验，观察给药局部和全身性反应情况，为婴幼儿临床试验和安全用药提供试验依据，现报告如下。

材料与方法 一、药品与试剂 七参连湿疹膏（组方：黄连、苦参、苍术、重楼、三七、白鲜皮、炉甘石、花椒、冰片、甘草）及基质均由同一生产企业提供。2，4一二硝基氯苯，化学试剂产品，用橄榄油配制成1%和0.1%浓度。致敏用1%浓度，激发用0.1%浓度，硫化钠。

二、试验动物 健康幼龄（2月龄）家兔，雌雄各半，体重0.8～1.2kg，健康幼龄豚鼠，雌雄各半，体重150～200g，由昆明医科大学实验动物学部提供。动物单笼饲养，自由饮食。适应性饲养1周后开始实验。

三、方法 1.幼龄家兔皮肤局部刺激反应[6]

①分组与给药 设置单次给药完整皮肤试验组和破损皮肤试验组（包括七参连湿疹膏受试药物组、空白基质阴性对照组共2组，每组6只幼龄家兔），多次给药整皮肤试验组（包括七参连湿疹膏受试药物组、空白基质阴性对照组共2组，每组6只）和破损皮肤试验组（包括七参连湿疹膏受试药物组、空白基质阴性对照组共2组，每组6只幼龄家兔）。

②对幼龄家兔完整皮肤的刺激反应 健康幼龄家兔6只，雌雄各半，将其背部两侧对称脱毛2块，面积每侧约5.0cm×7.5cm。试验采用同体左右侧自身对照法，即左侧背部皮肤涂搽七参连湿疹膏4g，右侧背部皮肤涂擦基质4g。

③对幼龄家兔破损皮肤的刺激反应 健康幼龄家兔6只，雌雄各半，将其背部两侧对称脱毛2块，面积每侧约5.0cm×7.5cm。用无菌8号针头划直径为2cm的“#”形擦伤，注意只刺破表皮，不伤及真皮，以有轻度渗血为度。试验采用同体左右侧自身对照法，即左侧背部皮肤涂搽七参连湿疹膏4g，右侧背部皮肤涂搽基质4g。

④单次给药皮肤刺激性试验 取完整去毛皮肤和破损皮肤各1组（每组6只），将受试物4g均匀涂抹于左侧脱毛区皮肤上，然后用一层保鲜膜、两层纱布覆盖，再用剪去指套的乳胶手套包住整个背部和腹部加以固定；右侧涂布空白基质作为阴性对照。涂药后用两层纱布和一层无刺激性胶布固定6h，贴敷6h后，去除受试药物，并用0.9%氯化钠溶液洗净给药部位。给药前及给药后0.5h、1h、24h、48h和72h，观察动物有无红斑和水肿反应，涂搽部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄，记录出现和消退时间。

⑤多次给药皮肤刺激性试验 取完整去毛皮肤和破损皮肤组各1组（每组6只），给药方式同单次用药，但在同一部位连续给药14d，每次给药时间相同，每次涂药后用两层纱布和一层无刺激性胶布固定6h。固定结束后，除去受试药物并用温水清洁给药部位。连续涂药14d。每天给药前及末次给药后0.5h、1h、24h、48h和72h，观察动物有无红斑和水肿反应，涂搽部位是否有色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄，记录出现和消退时间。

⑥刺激强度评价[6，8]分别于给药前及给药后0.5h、1h、24h、48h和72h观察实验区部位皮肤是否出现红斑及红肿。评价标准：（1）红斑：0分：皮肤处未出现红斑；1分：勉强可以看见皮肤处存在轻微红斑；2分：明显可以看见皮肤处中度红斑；3分：重度红斑；4分：红斑呈紫红色，形成焦痂； （2）水肿：0分：未出现水肿；1分：勉强可以看见轻微水肿；2分：明显可以看见水肿处高出周围皮肤；3分：水肿处高出周围皮肤1mm，重度水肿，有较为清晰的轮廓；4分：严重水肿，潜在扩大、水肿，甚至破溃、严重水肿。皮肤刺激性强度评价标准：分值0.000～0.049为无刺激性；分值为0.50～1.99为轻度刺激性；分值为2.00～5.99为中度刺激性；6.00～8.00为强刺激性。

刺激反应平均分值=（红斑形成总分+水肿形成总分）/动物数。

2.幼龄豚鼠皮肤过敏反应[7]①分组及给药量幼龄豚鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，10只/组。受试药组：七参连湿疹膏按每只每次0.2mL涂搽；基质对照组：软膏基质按每只每次0.2mL涂搽；阳性对照组：2，4一二硝基氯苯，用橄榄油配制成1%和0.1%浓度。致敏用1%浓度，激发用0.1%浓度。均按每只0.2mL涂搽；空白对照组：0.9%生理盐水，按每只0.2mL涂搽。

②致敏接触 将幼龄豚鼠背部两侧毛脱掉，去毛区范围每侧约3cm×3cm。脱毛后24h，将上述各受试物分别涂于各组动物左侧脱毛区（阳性对照用1%2，4一二硝基氯苯），用一层油纸及二层纱布覆盖，再以无刺激胶布封闭、固定，持续6h。每只动物单笼饲养，于第7d和第14d，以同样方法各重复一次，共3次。

③激发接触 末次给受试物致敏后14d，将上述各受试物分别涂于各组动物右侧脱毛区（阳性对照用0.1%2，4一二硝基氯苯），6h后用温水清除受试物，即刻观察，然后于24h、48h、72h再次观察皮肤过敏反应情况。

④致敏性评价 按前述“刺激强度评价标准”计算激发接触后24h、48h和72h时间点过敏反应分值；致敏性评价标准[8，9]：致敏发生率0%～10%为无致敏性；11%～30%为轻度致敏性；31%～60%为中度致敏性；61%～80%为高度致敏性；81%～100%为极度致敏性。

致敏发生率=出现皮肤红斑、水肿或全身性过敏反应的动物数/动物总数

结 果 一、单次涂搽皮肤给药对幼龄家兔皮肤的刺激反应 七参连湿疹膏及其基质对照单次涂搽于家兔完整皮肤和破损皮肤后，各组动物均未观察到严重的红斑及水肿出现，也未见色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况发生，见表1。用药前及用药后24h、48h和72h的刺激评分均为0分；用药后0.5h和1h七参连组评分均为0.33，基质对照组评分为0.33和0.17，这与药物涂搽于皮肤固定物摩擦皮肤有关，其分值＜0.49，为无刺激反应，见表2。

二、多次涂擦皮肤给药对幼龄家兔皮肤的刺激反应 七参连湿疹膏及其基质多次涂搽于幼龄家兔完整皮肤后，在14d内，涂药过程中以及每次涂药后各组动物均未观察到严重的红斑及水肿出现，也未见色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况发生。在14d内，每次用药前及用药后48h和72h的刺激评分均为0分；用药后0.5h、1h和24h七参连湿疹膏组和基质对照组评分均为0.33、0.33和0.17，这与药物涂搽于皮肤固定物摩擦皮肤有关，其分值＜0.49，为无刺激反应，见表3。

七参连湿疹膏及其基质多次涂搽于幼龄家兔破损皮肤后，各组动物均未观察到严重的红斑及水肿出现，也未见色素沉着、出血点、皮肤粗糙或皮肤菲薄等情况发生。在14d内，每次用药前及用药48 h和72h的刺激评分均为0分；用药后0.5h、1h和24h七参连湿疹膏组和基质对照组评分均为0.50、0.33和0.17，这与药物涂搽于皮肤固定物摩擦皮肤有关，0.5h评分为其0.50，属轻度刺激反应，1h后分值＜0.49，为无刺激反应，见表4。

三、对幼龄豚鼠皮肤过敏性的影响 在致敏期间，2，4一二硝基氯苯阳性药物组，部分动物出现红斑和水肿，其余各组动物均未见过敏反应；激发后，生理盐水空白对照组1只动物在激发后24h出现轻度红斑，致敏发生率为10%，为无致敏性，见表5。在激发给药后24h、48h和72h，七参连湿疹膏组致敏率分别为10%、0%和0%；其基质对照组致敏率分别为10%、0%和0%；阳性药物组各时间点的致敏发生率均为100%，见表6。

表1 七参连湿疹膏单次涂搽幼龄家兔完整皮肤的刺激反应评分（n=6）

讨 论 中药外用为传统中医药治疗疾病尤其是皮肤疾病的重要手段，但近年来外用中药过敏的临床事件时有发生。中药致皮肤过敏反应的类型有接触性皮炎、局部皮肤刺激、光毒性及光变应性皮炎、系统性接触性反应等，引起这些反应的中药既有单味药，也有复方制剂[10]。这些中药外用可能引起局部过敏反应或全身过敏反应，严重者甚至中毒致死[11]。因此，有必要对外用中药进行系统的安全性评价。

表2 七参连湿疹膏单次涂搽幼龄家兔破损皮肤的刺激反应评分（n=6）

表5 七参连湿疹膏涂搽幼龄豚鼠皮肤过敏试验结果（n=10）

表6 七参连湿疹膏涂搽幼龄豚鼠皮肤的致敏发生率和致敏性

表3 七参连湿疹膏多次涂搽幼龄家兔完整皮肤的刺激反应评分（n=6）

表4 七参连湿疹膏多次涂搽幼龄家兔破损皮肤的刺激反应评分（n=6）

本次家兔皮肤刺激试验结果显示，对幼龄家兔的正常皮肤和破损皮肤，七参连湿疹膏单次及多次涂搽皮肤用药的刺激指数均≤0.49。病理组织学检查也未见明显异常，可认为无刺激性。在激发给药后24h、48h和72h，七参连湿疹膏组致敏率分别为10%、0%和0%，根据致敏性评价标准[8，9]，致敏发生率在0%～10%，提示七参连湿疹膏无致敏性。

综上所述，七参连湿疹膏单次及多次经皮涂搽对幼龄家兔的完整皮肤和破损皮肤均无明显刺激性；给幼龄豚鼠皮肤用药后，无过敏作用。皮肤安全性评价实验表明七参连湿疹膏对幼龄动物皮肤给药使用安全。