陈标卫　叶锡银

【摘要】 目的：探討信号诱导增殖相关蛋白1（SIPA1）和16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白（HPV16/18E6）在宫颈癌中的表达及其与临床病理之间的关系。方法：选取本院宫颈癌患者120例为宫颈癌组，子宫肌瘤患者80例为正常宫颈组，均采用ELPS法检测SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表达。比较两组SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达情况，分析SIPA1蛋白与HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的表达关系，以及宫颈癌组织中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达与临床病理特征之间的关系。结果：正常宫颈组SIPA1阳性率高于宫颈癌组，HPV16/18E6阳性率显著低于宫颈癌组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）;Spearman秩和检验显示，宫颈癌组织中SIPA1蛋白与HPV16/18E6蛋白呈负相关（P<0.05）;单因素分析显示，宫颈癌组织中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达与盆腔淋巴结转移有关（P<0.05），与年龄、临床分期以及病理分级均无关（P>0.05）。结论：SIPA1蛋白低表达、HPV16/18E6蛋白高表达是宫颈癌组织学特征，且在宫颈癌盆腔淋巴结转移中发挥重要作用。

【关键词】 信号诱导增殖相关蛋白1; 16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白; 宫颈癌; 免疫组织化学

【Abstract】 Objective：To discuss the expression of signal induced proliferation associated protein 1（SIPA1）and human papillomavirus type 16 and 18 E6 protein（HPV16/18E6）in cervical carcinoma and their relationship with clinicopathology.Method：A total of 120 patients with cervical carcinoma were selected as cervical carcinoma group，and 80 patients with uterine leiomyoma were selected as normal cervical group，the expression of SIPA1 and HPV16/18E6 protein were detected by ELPS.The positive expression of SIPA1 and HPV16/18E6 protein between two groups was compared，the relationship between SIPA1 protein and HPV16/18E6 protein expression in cervical cancer tissues and the relationship between SIPA1 and HPV16/18E6 protein expression and clinicopathological characteristics were analyzed.Result：The positive rate of SIPA1 in normal cervical group was higher than that of cervical carcinoma group，and the positive rate of HPV16/18E6 was lower than that of cervical carcinoma group，the differences were statistically significant（P<0.05）.Spearman rank sum test showed that SIPA1 protein was negatively correlated with HPV16/18E6 protein in cervical carcinoma（P<0.05）.Univariate analysis showed that the positive expression of SIPA1 and HPV16/18E6 protein in cervical carcinoma tissues was related to pelvic lymph node metastasis（P<0.05），but not related to age，clinical stage and pathological grade（P>0.05）.Conclusion：Low expression of SIPA1 protein and high expression of HPV16/18E6 protein are histological characteristics of cervical carcinoma，and play an important role in pelvic lymph node metastasis of cervical carcinoma.

【Key words】 Signal induced proliferation associated protein 1; Human papillomavirus type 16 and 18 E6 protein; Cervical carcinoma; Immunohistochemistry

First-authors address：Nancheng Hospital of Dongguan City，Dongguan 523071，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.03.031

人乳头瘤病毒（HPV）是一种小型的双链脱氧核糖核酸病毒，HPV感染所致宿主宫颈癌发生已是临床共识[1-3]。信号诱导增殖相关蛋白1（SIPA1）和16、18型人乳头瘤病毒E6蛋白（HPV16/18E6）基因及其编码蛋白在宫颈癌的发生和发展中似乎有着紧密的关系。有关SIPA1、HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织和正常宫颈组织中生物学行为关系的研究鲜有报道。为此，本院开展研究，试图通过探讨SIPA1、HPV16/18E6在宫颈癌中的表达及其与临床病理之间的关系，为宫颈癌预测和临床防治提供线索。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年6月-2017年6月于本院行广泛子宫切除或联合盆腔淋巴结切除的宫颈癌患者120例为宫颈癌组，另选取同期行子宫切除的子宫肌瘤患者80例为正常宫颈组，患者的宫颈组织均为在病理科存档的石蜡组织切片。纳入标准：经组织病理学检查，确诊为宫颈癌，且具有完整的临床资料;无放疗禁忌证;既往无严重生物制剂过敏史;本研究经医院伦理委员会批准，且患者自愿参与并签署知情同意书。排除标准：合并其他肿瘤者;肝肾功能不全和骨髓功能异常者;心脑血管疾病者;有放化疗史或既往肿瘤病史者。

1.2 方法 采用ELPS法检测两组SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表达。SIPA1小鼠抗人类多克隆抗体试剂盒购自赛默飞世尔公司，HPV16 E6、HPV18 E6新西兰兔抗人类多克隆抗体试剂盒购希施生物科技（上海）有限公司。4 mm常规石蜡切片，采用正常肝脏组织作为SIPA1阴性对照，采用已知阳性的宫颈癌组织作为HPV16/18E6阳性对照，采用0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为空白对照，具体染色步骤按照试剂盒说明书进行。结果判定：通过双盲法由两位病理医生独立进行评估。每张切片显微镜下随机抽取10个400倍视野，观察500个细胞，SIPA1的细胞质出现棕黄色颗粒标志阳性，HPV16/18E6的细胞核出现棕黄色颗粒标志阳性，不着色细胞视为阴性表达，计算阳性细胞的百分率，阳性细胞数≥5%判定为阳性[4-5]。

1.3 观察指标 比较两组SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达情况，分析SIPA1蛋白与HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的表达关系，以及宫颈癌组织中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达与临床病理特征之间的关系。

1.4 统计学处理 使用SPSS 20.0软件对所得数据进行统计分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验;计数资料以率（%）表示，比较采用字2检验;相关关系采用Spearman秩和检验。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组基线资料比较 宫颈癌组年龄23～69周岁，平均（38.49±6.31）周岁;临床分期：ⅠA 期38例，ⅠB期 45例，ⅡA期 37例;病理分级：G1级48例，G2级53例，G3级19例;盆腔淋巴结转移：有39例，无81例。正常宫颈组年龄22～67周岁，平均（36.18±7.20）周歲。两组年龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 两组SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表达情况比较 正常宫颈组SIPA1阳性率高于宫颈癌组，HPV16/18E6阳性率显著低于宫颈癌组，比较差异均有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.3 SIPA1蛋白与HPV16/18E6蛋白在宫颈癌组织中的表达关系分析 Spearman秩和检验显示，宫颈癌组织中SIPA1蛋白与HPV16/18E6蛋白呈负相关（r=-0.540，P<0.05）。

2.4 宫颈癌组织中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表达与临床病理特征的关系分析 单因素分析显示，宫颈癌组织中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达与盆腔淋巴结转移有关（P<0.05），与年龄、临床分期以及病理分级均无关（P>0.05），见表2。

3 讨论

HPV16/18型均存在E6基因，E6蛋白是HPV E6基因编码蛋白。研究发现，E6蛋白的表达贯穿于宫颈癌发生与发展，从分子生物学机制上观察到，E6蛋白除了在泛素化连接酶介导下与p53蛋白结合并发生多聚泛素化和抑制p53蛋白对细胞周期调控作用之外，还通过降解E6TP1蛋白的途径来活化Rap1通路促进宫颈癌的发生发展[6-10]。Smith等[11]指出，Rap1在活化形式中介导细胞连接和黏附，非活化形式Rap1抑制黏附连接形成，甚至使已形成的黏附连接破坏，由此可见Rap1通路存在细胞黏附机制，参与宫颈癌细胞浸润和转移。一直以来SIPA1都被认为是抑癌基因，一项动物试验指出，SIPA1基因丢失的小鼠将会发生慢性髓性白血病，科室该项研究未能解析其中的内在机制[12]。另有研究指出，SIPA1是一种Rap1的GTP酶活化蛋白[13-14]，SIPA1蛋白催化Rap1从活性形式到非活性形式[15-18]。

本研究结果显示，正常宫颈组SIPA1阳性率高于宫颈癌组，HPV16/18E6阳性率显著低于宫颈癌组，比较差异均有统计学意义（P<0.05）;Spearman秩和检验显示，宫颈癌组织中SIPA1蛋白与HPV16/18E6蛋白呈负相关（P<0.05）。提示，SIPA1、HPV16/18E6基因共同参与Rap1通路调控，二者相互之间存在制约的内在机制，使得SIPA1、HPV16/18E6蛋白的表达截然相反。本研究结果显示，宫颈癌组织中SIPA1、HPV16/18E6蛋白的阳性表达与盆腔淋巴结转移有关（P<0.05），与年龄、临床分期以及病理分级均无关（P>0.05）。提示，SIPA1、HPV16/18E6基因在宫颈癌浸润和转移中发挥重要作用，HPV16/18E6蛋白的高表达促进宫颈癌细胞浸润和转移，SIPA1蛋白的高表达抑制宫颈癌细胞浸润和转移。这可能因为宫颈癌浸润和转移定植必须经历细胞连接和黏附这一过程[19-20]，SIPA1蛋白相对量降低的情况下，不能更多地催化Rap1从活性形式到非活性形式，使得Rap1在活化形式中介导细胞连接和黏附，促进宫颈癌细胞浸润和转移。

综上所述，SIPA1蛋白低表达、HPV16/18E6蛋白高表达是宫颈癌组织学特征，且在宫颈癌盆腔淋巴结转移中发挥重要作用。

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（收稿日期：2018-06-22） （本文编辑：董悦）