周海燕,薛雨顺,王新川,高宁宁

1.陕西省人民医院眼科(西安 710068);2.空军军医大学基础医学院(西安 710032)

大量的研究已证实蛋氨酸(Methionine,Met) 对维持晶状体透明度是非常重要的，它是抗氧化物谷胱甘肽的前体[1-2]。甜菜碱高半胱氨酸甲基转移酶(Betaine-homocysteinemethy transferase，BHMT)是Met循环中重要的酶，它利用同型半胱氨酸(Homocysteine，Hcy)和提供甲基的甜菜碱(Betaine，Bet)催化 Met 的再合成[3-4]。在胎儿晶状体文库中，BHMT 是一个大量表达的基因[5]。前期我们利用基于同位素相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)标记的蛋白质组学技术研究分析了不同年龄人白内障晶状体核与透明晶状体核间的差异蛋白质,首次报道了BHMT在高龄组白内障晶状体核区的水平较年轻组明显下调，进一步通过新的临床白内障晶状体标本进行了验证[6]。但其在晶状体老化和白内障形成中如何参与代谢等确切机制尚不清楚。本研究将构建稳定过表达BHMT的慢病毒载体，并转染人晶状体上皮细胞，为进一步研究其在白内障发生发展中的作用提供生物学基础。

材料与方法

1 主要试剂及仪器 人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cells,HLEC)由本实验室保存,慢病毒GV358载体、AgeI / AgeI 酶切，购自上海吉凯基因化学技术有限公司。1kp DNA ladder Marker(Fermentas公司),琼脂糖(赛百盛公司),250 bp DNA ladder Marker与Primer(捷瑞生物公司)。In-FusionTMPCR Cloning Kit (Clontech公司),琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒购自天根生化,Taq polymerase(SinoBio公司),限制性内切酶(NEB公司)。dNTP(Takara公司), PCR仪(Applied Biosystems), DMEM培养基(含10% 胎牛血清)购自 Gibco 公司，引物由上海吉凯基因化学技术有限公司合成。

2 细胞培养 HLEC培养于含体积分数15% 胎牛血清的低糖 DMEM 7培养液中，置于37 ℃、体积分数为5%CO2的恒温孵箱内培养。

3 研……