俞焕腾,马 骉,2,方结红,林委,张明洲,2

(1．中国计量大学 生命科学学院,浙江 杭州 310018；2．浙江省生物计量及检验检疫技术重点实验室,浙江 杭州 310018)

子宫颈癌是一种常见妇科恶性肿瘤,对女性健康造成很大影响[1]。在我国,宫颈癌的发病率快速上升,是发病率增长速度最快的癌症,居女性生殖系统肿瘤首位[2]。研究发现,高危亚型人乳头瘤病毒(HPV)持续感染是宫颈癌频发的主要原因。因此,检测宫颈细胞样本中HPV载量和基因型,已成为宫颈癌预判的一种常规诊断途径,为早期治疗方案的制定提供依据。

如今,传统培养法已经满足不了快速检测的要求,子宫颈癌的早期诊断需另辟新径[3]。随着分子生物学的发展,结合当下流行病学的研究现状,针对HPV病毒的临床诊断试剂种类较多。按照分子生物学的方法学原理,主要分为3类:荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR)、基因芯片技术(gene chip technique)、第二代杂交捕获技术[4](Hybrid capture 2)。这些技术以高特异性、高灵敏度等优势,为病毒的快速筛查提供了支持。然而,相较于等温扩增方法,这些检测技术较大程度的依赖精密设备,不适用于现场快速诊断[5-6]。

作为一种高效恒温的核酸扩增技术,环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)利用独特的链置换循环,在60 ℃～65 ℃的恒温环境下,短时间内实现靶序列的大量扩增[7]。扩增产物的常规验证多由琼脂糖凝胶电泳和浊度检测等手段实现。为解决开盖污染等问题,在反应液中添加钙黄绿素等荧光染料,根据反应前后颜色的变化,实现可视化判读反应结果[8]。……