陈 烁， 龚银银， 颜景颖， 汪慧敏， 冉 云， 张 涛

在我国，膀胱癌的发病率位居恶性肿瘤的第5位，位居男性泌尿生殖系统恶性肿瘤的第1位，且复发率高达50%～70%[1]。因此，探讨膀胱癌发生发展的分子机制，寻找可靠的生物学标志物和有效的基因治疗靶点，对提高膀胱癌患者的生存率显得尤为重要[2]。研究认为，CXCR4基因与多种恶性肿瘤的发生发展关系密切[3-4]。本研究拟通过RNA干扰技术下调CXCR4基因的表达水平，观察CXCR4基因表达下调对膀胱癌T24细胞增殖、凋亡、迁移功能方面的影响。

1 材料与方法

1.1 材料 人膀胱癌T24细胞株(中国典型培养物保藏中心)；兔抗人CXCR4抗体(美国R&D公司)；转染脂质体Lipofectamin 2000(美国Invitrogen公司)；RPMI 1640细胞培养液及胰蛋白酶(美国Gibco公司)；10%的胎牛血清(杭州四季青公司)；噻唑蓝(MTT)(美国Sigma公司)；Transwell小室(美国Costar公司)；Lenti-CXCR4-siRNA慢病毒液由中山大学附属第一医院胃肠外科王天宝教授馈赠。

1.2方法

1.2.1细胞培养及转染分组 在无菌条件下，将人膀胱移行细胞癌T24细胞株置于含有10%胎牛血清、1%双抗(链霉素+青霉素)的RPMI 1640培养液中培养，于37 ℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养。转染前1天，把处于对数生长期的T24细胞以每孔5×105个的密度接种在6孔板中；次日，当T24细胞浓度达50%～70%时进行转染实验。将T24细胞分为3组：(1)干扰组，应用阳离子脂质载体Lipofectamine 2000将小干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)转染入T24细胞，转染5 h后，更换含血清及抗生素的培养液再继续培养；(2)阴性对照组，将转染siRNA空载体作为阴性对照组；(3)空白对照组，不进行任何处理。

1.2.2Western-blot检则 取80 μg蛋白质样品进行聚丙烯酰胺凝胶电泳，转膜，室温下封闭……