刘玲玲，宿亚菲，张乐，陈冬哲，王召宝，邢芳林，杨琳，刘立存，孙雯雯

1. 山东大学附属省立医院 临床医学检验部，山东 济南 250021；2. 济宁医学院 医学信息工程学院，山东 日照 276826

引言

C反应蛋白（C-reactive protein，CRP）多用于对感染的诊断、自身免疫性疾病活动的判断、炎症的诊断及疗效评估等[1-2]。快速定量测定CRP，可快速指导临床用药，避免对病毒感染或可能自限性表皮细菌感染的病人滥用抗生素；CRP可以辅助细菌与非细菌感染间的鉴别，判断组织炎症或损伤的程度，而且有利于观察患者对治疗的反应及术后监测。末梢血CRP检测在儿童医院、妇幼保健院、各级综合医院的儿科化验室、急诊化验室已经广泛开展，但目前市场上仪器、试剂、方法学很多，不同品牌的仪器、试剂之间检测结果的一致性有很多差异。DH71CRP血液分析仪全血检测CRP，用血量少（末梢血模式仅需20 μL），检测时间短（1 min），能同时完成血常规计数、血细胞五分类和CRP的检测。根据ISO15189:2012 CNAS CL02《医学实验室质量和能力认可准则》的要求，参考WS/T403-2012：《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》[3]，最新发布的卫生行业标准WS/T492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》[4]，NCCLS EP5-A2[5]、EP15-A2[6]、EP0-A2[7]、EP6-P2[8]、EP9-A2[9]、C28-A2[10]文 件， 参 考CRP及其他检验项目测定的性能验证的研究资料[11-17]，对本实验室新安装的DH71CRP血液分析仪测定CRP的性能进行验证和评价。

1 资料与方法

1.1 试剂与仪器

1.1.1 验证仪器及参比仪器

验证仪器为DH71CRP全自动血液分析仪（帝迈），参比仪器为日本HORIBA公司生产的Pentra MSCRP血液分析仪（与OLYMPUS AU5800比对结果合格，校准与性能验证合格，室内质控在控）和AU5830全自动生化分析仪（OLYMPUS ，参加国家卫计委临床检验中心室间质评CRP检测项目、成绩合格,校准与性能验证合格，室内质控在控）。1.1.2 试剂

原装配套试剂（帝迈，在有效期内）；ABX原装配套试剂（在有效期内），共同的质控品为Pentra MSCRP配套的CRP定值质控品ABX CRP Trol（日本HORIBA公司,批号：170224L3N3；有效期：20180224）；OLYMPUS AU5800全自动生化分析仪原装配套试剂（在有效期内），质控品为特定蛋白定值质控品LPC（朗道公司，批号：463；有效期 ：20180228）。

1.2 标本来源

所有检测标本选择2017年6月20日至2017年7月12日就诊的门诊和住院患者和健康体检人员的EDTA抗凝全血标本和血清标本。

1.3 方法

性能验证指标：精密度（批内、批间）、准确度、可比性、线性范围、临床可报告范围、携带污染率等。

1.3.1 CRP的检测

用DH71CRP血液分析仪和Pentra MSCRP血液分析仪检测全血CRP，在保证两分析仪校准和室内质控均合格的条件下，严格按照仪器与试剂说明书操作。

1.3.2 本底（空白）检测

用仪器配套稀释液作为标本，在仪器选定的检测模式下计数3次。3次结果最大的要小于厂家声明的本底计数要求；若开机本底未达到要求者，必须厂家售后服务工程师检修合格后才能做余下相关测试。

1.3.3 携带污染率测定

根据EP10-A2文件，取高浓度全血标本，连续测定3次，测定值分别为H1、H2、H3；再取低浓度全血标本，连续测定3次，测定值分别为L1、L2、L3。按公式计算携带污染率。携带污染率＝(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4 精密度验证

根据WS/T403-2012、WS/T492-2016和EP5-A2、EP15-A2文件，参照厂家声明的精密度要求进行验证。

1.3.4.1 批内精密度

取高、低2个水平的新鲜全血，连续重复测定21次，取后20次结果计算CV及S；将实验所得的CV值与仪器厂家声明的CV值（≤10mg/L，S≤0.5 mg/L；≥10 mg/L，CV≤5.0%）进行比较。

1.3.4.2 批间精密度

取高、低两个水平质控品，每天测定3次，每次检测之间相隔2 h，连续测定5 d，一共收集15个数据。如果因为质量控制程序或操作问题判断一次为失控，应剔除数据，并增加执行一次检测；计算变异系数（CV），标准差（S）。实验所得的CV值与仪器厂家声明的CV值（CV≤10.0%）进行比较，CV小于或等于CRP精密度评价标准判为合格。

1.3.5 准确度验证

本研究使用临床患者样品系统间的比对参考WS/T492-2016验证方案进行准确度的验证。参考WS/T407-2012[18]《医疗机构内定量检验结果的可比性验证指南》、EP9-A2文件，具体方案如下：4天内共选取20份当日采集的CRP结果分布在可报告范围内的的患者血液标本，同时在参比仪器和验证仪器上进行检测，计算配对结果之间的差值，并绘制差值与比较值之间的差值图，用图形显示；将数据进行配对t检验计算，确定方法之间的平均差值以及差值的标准差；计算置信区间和（或）验证限，将测量的差值（或百分差值）与厂家的声明进行比较。

1.3.6 线性范围验证

参照WS/T408-2012[19]：临床化学设备线性评价指南要求，参照EP6-A2文件，本试验选取1份接近预期上限的高值全血标本，与仪器配套的稀释液进行混合配制，分别按100%、80%、60%、40%、20%、10%的比例进行稀释，每个稀释度测定2次。将实测值均值与理论值作比较（偏离应小于10%），计算y＝ax＋b，验证线性范围。判定标准：a值在1±0.05范围内，相关系数r≥0.975或r2≥0.95为可接受。

1.4 统计学分析

采用Excel 2003软件进行数据分析，对各指标的检测结果分别计算算术平均值、S及相对偏差，可比性和线性验证计算回归方程y＝ax＋b和r。

2 结果

2.1 携带污染率

DH71CRP血液细胞分析仪测定CRP的携带污染率＝(L1-L3）/(H3-L3)×100%=(3.3-3)/(140.6-3)×100%=0.22%， 厂家声明的携带污染率是≤0.5%，符合要求。

2.2 精密度验证

批间、批内精密度验证结果均低于判定标准，见表1，达到了仪器声明的精密度。

表1 DH71CRP血液分析仪全血样本的CRP精密度验证结果

2.3 准确度验证

参考WS/T492-2016验证方案进行准确度的验证，使用临床患者样品进行全血检测CRP两系统对比试验和全血与血清CRP两系统对比试验，均计算配对结果之间的差值，并绘制差值与比较值之间的差值图，用图形显示；将数据进行配对t检验计算，确定方法之间的平均差值以及差值的标准差；计算置信区间和（或）验证限，将测量的差值（或百分差值）与厂家的声明进行比较。全血CRP检测的比对结果，见表2。图形显示，见图1。全血与血清CRP检测的比对结果，见表3。图形显示，见图2。

表2 DH71CRP血液分析仪全血CRP的准确度验证

置 信 限 ：P=0.01，t临 界 值 ：2.861，n=20， 上 限 ：12.98%，下限：3.17%。

验证限：P=0.01；上限：19.91%，下限：10.09%；厂家声明15%，实验室计算的“偏倚”8.08%落在置信限之中，证明了厂家的声明。

图1 全血CRP比对的百分差值图

表3 DH71CRP血液分析仪全血CRP与血清的准确度验证

置 信 限 ：P=0.01，t临 界 值 ：2.861，n=20， 上 限 ：18.48%，下限：0.42%.

验证限：P=0.01；上限：21.16%，下限：8.84%；厂家声明15%，实验室计算的“偏倚”6.49%落在置信限之中，证明了厂家的声明。

2.5 线性验证

参照WS/T408-2012、EP6-A2文件，本试验选取1份接近预期上限的高值全血标本，与仪器配套的稀释液进行混合配制，分别按100%、80%、60%、40%、20%、10%的比例进行稀释，每个稀释度测定2次。将实测值均值与理论值作比较（偏离应小于10%），计算y＝ax＋b，验证线性范围。得到CRP的线性回归方程：y=0.9724x-1.6159，r=0.9975，线性范围为0～210 mg/L。见图3。

图3 DH71CRP血液分析仪测定全血CRP线性验证

3 讨论

CRP在肝脏合成的能够与肺炎链球菌C多糖体反应的急性时相反应蛋白，近年来越来越多的研究证实CRP在炎症性疾病、创伤、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、心脑血管疾病等的诊断、鉴别诊断、疗效评价、预后评估中有重要的临床应用价值[20]。特别是评价急诊患者急性感染和炎性疾病的客观指标之一，与其他的炎症指标PCT、SAA、WBCC联合检测提高了CRP的诊断效能，有利于急诊和儿科患者的个性化诊断和治疗，避免了抗生素的滥用[21]。快速、准确的CRP检测系统成为临床的迫切需要。

本研究中，DH71CRP全自动血液分析仪免疫比浊法检测全血CRP的精密度（批内CV%低值2.23%，高值6.41%；批间CV%低值3.97%，高值3.75%）、携带污染率（0.22%）、准确度（与Pentra MSCRP血液分析仪检测全血CRP结果比对分析，回归方程：y=1.1284x-5.107，r=0.9942；同时由于CRP检测采用了HCT校正技术，其检测结果与全自动生化分析仪AU5800血清CRP的比对分析，回归方程：y=0.8197x+15.015，r=0.9933）和线性（线性回归方程为：y=0.9724x-1.6159，r=0.9975，线性范围为 0.2～210 mg/L）。在精密度、准确度、携带污染率性能均达到了厂家声明的要求，但线性范围未达到厂家声明的0.2～320 mg/L，但能满足临床患者全血标本检测CRP的需求，是一台性能良好的检测全血CRP的血液分析仪，完全能满足临床上全血CRP的准确定量分析。

综上所述，DH71CRP全自动血液分析仪免疫比浊法检测全血CRP，主要性能符合质量目标要求。但是，在使用中应当注意如果仪器CRP结果有“*”的报警提示时，需要查找标本、仪器、试剂等检测系统的原因，采取合理的、有效的措施，确保患者检验报告的准确性，给临床医师提供更多有价值的信息。如果样本CRP结果＞210 mg/L时，必须使用仪器配套的稀释液对全血样本进行预稀释后，再进行测定，测定结果乘以稀释倍数后发报告。因此，要求检验人员在日常报告审核工作中，应根据本科室制定的复检规则并结合仪器报警提示信息，在必要时进行标本复检。