姚淮育 吴虹谚 何昊

摘要：目的  評价荟生源两种组方的安全性，评估其临床使用安全性，为功能性食品开发和临床安全用药提供实验依据。方法  将26只SPF级昆明小鼠采用随机数目表法随机分为3组，其中实验组1、实验组2各10只，空白组6只，雌雄各半。实验组1以荟生源0.96 g+生理盐水0.17 ml（按配方1最大溶解度进行配置，有效量接近于成人每日服用量200倍）灌胃、实验组2以荟生源0.4 g+生理盐水0.63 ml（按配方2最大溶解度进行配置，有效量接近于于成人每日标准服用量200倍），两组实际灌胃量均为0.8 ml;空白组以生理盐水0.8 ml灌胃，灌胃后连续观察7 d。比较3组一般情况、死亡情况、大体解剖及镜下特点。结果  3组小鼠体重、饮水量、活动度均正常，差异无统计学意义（P>0.05）;实验过程中各组均无小鼠死亡，大体解剖肉眼观察小鼠各脏器均无变性、充血、水肿、坏死等异常现象;镜下对照组小鼠肝脏、肾脏细胞形态、结构、大小均正常，无坏死、无病理性改变。实验组1小鼠肝细胞形态、结构、大小均正常，肝小叶组织结构正常;实验组2中出现1例肝细胞胞浆疏松化。各组所有动物肾组织结构肾小管结构正常，皮质与髓质分界线清楚，无淋巴细胞浸润。结论  荟生源两种组方对小鼠无急性毒性作用，具有较好的安全性。

关键词：荟生源;经口急性毒性实验;小鼠

中图分类号：R285.5                                 文献标识码：A                                 DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.020

文章编号：1006-1959（2019）11-0072-04

Abstract：Objective  To evaluate the safety of Huishengyuan and its clinical safety， so as to provide experimental basis for the development of functional food and the safe use of drugs in clinic.Methods  26 SPF Kunming mice were randomly divided into three groups： experimental group 1 （n =10）， experimental group （n=10） and blank group （n=6）.Both male and female. In the experimental group 1， 0.96 g + normal saline 0.17 ml （configured according to the maximum solubility of the formula 1 and the effective amount is close to 200 times the daily dosage of the adult） was administered to the experimental group 1 and the experimental group 2 was 0.4 g+0.63 ml（of physiological saline. The maximum solubility of Formulation 2 was configured，and the effective amount was close to 200 times of the daily standard dose of adults.） The actual gastric perfusion volume was 0.8 ml; the blank group was intragastrically administered with 0.8 ml of normal saline， and was continuously observed for 7 d after gavage.Compare the general conditions， death， gross anatomy and microscopic features of the 3 groups.Results  The body weight， water consumption and activity of the three groups were normal， the difference was not statistically significant （P>0.05）. There was no mouse death in each group during the experiment.Gross dissection observed the mice without degeneration and congestion. Abnormal phenomena such as edema and necrosis; the morphology， structure and size of liver and kidney cells of the mice in the control group were normal， no necrosis and no pathological changes. The morphology， structure and size of hepatocytes in experimental group 1 were normal， and the structure of hepatic lobule was normal. In experimental group 2， 1 case of hepatocyte cytoplasmic loosening occurred. The renal tubular structure of all animals in each group was normal， the boundary between cortex and medulla was clear， and there was no lymphocytic infiltration.Conclusion  Huishengyuan two kinds of prescription have no acute toxicity to mice， and have good safety.

Key words：Huishengyuan;Oral acute toxicity test;Mouse

根據国家卫生计生委《中国癌症防治三年行动计划（2015～2017年）》统计显示，每年我国新发癌症病例约为310万。化疗是治疗肿瘤主要手段之一，对肿瘤患者的治疗有着明显效果，化疗所带来的不良反应常让患者的依从性降低，尽管患者的生存时间得到延长，但化疗相关不良反应却影响着患者的生活质量[1]，化疗所导致化疗相关性呕吐（chemotherapy-induced nausea and vomiting，CINV）是最常见的胃肠道反应。其发生率为65%～85%，顺铂致吐率几乎达100%[2，3]。西南医科大学护理器械研发实验室自主研制的“荟生源”产品，是依据中医“药食同源”特性，结合现代微生态研究进展而研制的产品，其根据化疗患者体质的不同，有两种不同的组方供患者使用。本实验主要通过小鼠对荟生源两种组方耐受性来验证其毒性作用，以进一步了解其生物学活性，为更好的应用于制药业和临床治疗提供依据。

1材料与方法

1.1实验动物及分组  SPF级昆明种小白鼠（Kunming mice，KM小鼠）38只（预实验12只，正式急性毒性实验26只），周龄为6～8周，体重18～22 g，由西南医大学实验动物中心提供[许可证号：SCXK（川）2013-17]。动物分组：将26只小鼠，随机数字表法分为3组，其中实验组1和实验组2，各10只，空白组6只，均雌雄各半，编号分笼饲养。本研究通过西南医科大学动物实验伦理审查，遵照动物福利进行实验，饲养温度20～25℃，湿度40%～70%。实验中动物均单笼饲养，正常饮水进食。

1.2实验用药  荟生源配方1（生姜、党参、藿香等），褐色水煎剂提取液，由西南医科大学护理器械研发实验室提供;荟生源配方2（生姜、低聚甘露糖、竹茹等），白色粉末，由西南医科大学护理器械研发实验室提供。根据荟生源的两种组方，配制两种药剂，供实验组1和实验组2使用。生理盐水，四川美大康佳乐药业有限公司生产。

1.3实验仪器  电子秤、1 ml注射器、灌胃针、手术器械、眼科镊、刀片、乳胶手套、薄膜手套、棉签、口罩、滤纸、酒精、安尔碘、甲醛溶液、无毒小鼠笼。

1.4实验方法

1.4.1预实验  参照《化学药物急性毒性试验技术指导原则》[4]进行，取体重18～22 g的小鼠12只，随机分为实验组和空白组，每组6只，雌雄各半。第1次灌胃前禁食（不禁水）12 h，实验组1灌胃给药浓度为1.2 g/ml，实验组2灌胃给药浓度为1 g/ml，给药容积均为40 ml/kg，空白组灌入等量的生理盐水，给药后观察小鼠7 d内毒性反应和死亡情况。根据动物急性毒性实验观察项目（表1）记录各组动物的一般生理状况、行为活动、进食、有无中毒状和有无动物死亡，试验结束后将小鼠用颈椎脱臼致死法处死进行解剖学检查。结果未见中毒表现，亦无小鼠死亡。因1.2 g/ml浓度和1 g/ml浓度已经分别达到两种组方化学药物最大给药浓度（20 g/kg和48 g/kg），受小鼠胃容量限制，未测定出半数致死量LD50，因此需做最大给药量测定。

1.4.2急性毒性实验（最大给药量测定）  根据预试验测不到LD50，另取剩余KM小鼠26只，其中实验组1、实验组2各10只，空白组6只，雌雄各半。与预试验实验步骤一致，试验前禁食（不禁水） 12 h，实验组1以荟生源0.96 g+生理盐水0.17 ml（按配方1最大溶解度进行配置，给药浓度为1.2 g/ml，有效量接近于成人每日服用量200倍）灌胃、实验组2以荟生源0.4 g+生理盐水0.63 ml（按配方2最大溶解度进行配置，给药浓度为1 g/ml，有效量接近成人每日标准服用量200倍），两组实际灌胃量均为0.8 ml;空白组以生理盐水0.8 ml灌胃，三组给药容积均为40 ml/kg。灌胃次日后每日上、下午各观察1次，实验条件同前，连续观察7 d。第8天将小鼠用颈椎脱臼致死法处死，取出各组小鼠肝、肾脏，随后在生理盐水中轻轻震荡除去内容物，用10%甲醛固定液固定24 h以上，将组织包埋、切片、HE染色。

1.5观察指标

1.5.1一般情况  根据动物急性毒性实验观察项目记录动物的外观、饮食、行为、活动度[5]、体重、有否死亡等情况。

1.5.2肝、肾脏  ①肉眼观察有无肿胀、囊肿、萎缩、出血、水肿、颜色异常、粘连、硬化等异常改变;②镜下观察各组小鼠体重以及肝脏、肾脏病理学变化。

1.6统计学处理  采用SPSS 20.0，对3组小鼠体重、饮水量、进食量进行单因素方差分析，计量资料以（x±s）表示，P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1一般情况及体重变化趋势  给药后小鼠活动减少， 1 d后活动恢复正常。试验期内无动物死亡，各给药组动物均未出现动物急性毒性实验观察项目中列举的急性中毒症状和表现，并且毛皮光滑，进食、体重增长及大小便正常，眼、鼻无异常分泌物，粘膜无充血、水肿，呼吸正常。在观察期间，实验组1、实验组2与空白组小鼠体重稳定增长，差异有统计学意义（P<0.05），3组相比较体重增长量无显著差异，差异无统计学意义（P>0.05），实验操作对小鼠体重无影响，见表2。

2.2小鼠肝、肾脏功能观察

2.2.1肉眼观察  未发现器官有肿胀、囊肿、萎缩、出血、水肿、颜色异常、粘连、硬化等异常改变，与空白对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.2.2 镜下观察  病理切片结果（图1）除实验组2中有1例肝脏有轻微改变外（主要表现为肝细胞胞浆疏松化较为明显，但未见肝细胞坏死及肝小叶结构的改变）（图2），其余所有小鼠肝脏组织结构、细胞形态正常，肝细胞未见明确变性、坏死改变，间质无明显充血，也未见炎性细胞浸润;所有小鼠双侧肾脏肾小球、肾小管均未见明确形态、结构的改变，未见细胞变性、坏死和脱落，肾小管内无管壁，间质无炎性细胞浸润。