田启会

(甘肃畜牧工程职业技术学院，甘肃 武威 733006)

1 材料与方法

1.1 采样

笔者于2018年4月份在某地区家禽养殖户中采集家禽样本，采集对象为散养鸡(养殖规模几百到一千羽不等)。每羽鸡的泄殖腔拭子和鸡喉拭子样各采集2份，每户选取2羽患病鸡，共50户养殖户，总计400份样品。用磷酸缓冲盐溶液(Phosphate Buffer Saline，PBS)保存于－20 ℃，运输时将其放置于干冰环境中。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

荧光检测仪由深圳市易瑞生物技术有限公司提供，批号为：20130509。

1.2.2 试剂

H5N1亚型禽流感抗原为哈尔滨生物制品六厂责任有限公司产品，批号为：20150208。H5N2亚型禽流感抗原为哈尔滨生物制品二厂责任有限公司产品，批号为：20150403。H9N2亚型禽流感抗原由武汉博沃生物科技有限公司提供，批号为：20160520。H6N6亚型禽流感抗原为哈尔滨兽研所产品，批号为：06606-050412。H5亚型流感病毒荧光免疫层析试纸条由武汉博沃生物科技有限公司提供，批号为：20160709。

1.3 方法

1.3.1 特异性试验

用2 mL PBS液分别溶解H5N1亚型禽流感抗原、H5N2亚型禽流感抗原、H6N6亚型禽流感抗原、H9N2亚型禽流感抗原，并用PBS液将其按1∶10的比例进行稀释，然后用移液器吸取75 μL的稀释液加入H5亚型流感病毒荧光免疫层析试纸条上，15 min后，用荧光检测仪读出数值。结果判定标准：若cut off值≥80判为阳性，若＜80则判为阴性。

1.3.2 敏感性试验

分别用PBS液稀释10倍、100倍、1 000倍H5N1亚型禽流感抗原和H5N2亚型禽流感抗原，然后用移液器吸取75 μL稀释液加入H5亚型流感病毒荧光免疫层析试纸条上，15 min后，用荧光检测仪读出数值。结果判定标准为：若cut off值≥80判为阳性，若＜80则判为阴性。

1.3.3 变异系数试验