任晓静，杨 涛，耿立成

缺血再灌注（ischemia/reperfusion，I/R）导致的肠损伤是创伤、脓毒症及腹部大手术等的严重并发症，是围手术期重症患者死亡的主要因素之一[1]。炎症反应、氧化应激、肠黏膜细胞凋亡及紧密连接破坏在肠I/R损伤的发生及进展中扮演重要的角色[2]。多项研究表明，黄芪甲苷（astragaloside IV, AS-IV）对I/R导致的脑、心肌、肝、肺等器官损伤均具有明确的保护作用[3-6]，然而AS-IV对I/R所致肠损伤的作用尚未见报道。本实验研究拟通过建立大鼠肠I/R损伤的动物模型，探讨AS-IV在调节肠I/R损伤中的治疗保护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康成年雄性SPF级、体质量180～220 g的Wistar大鼠，购于军事医学科学院实验动物中心。

1.1.2 主要药物与试剂 AS-IV（批号170302）购自南京森贝伽生物科技有限公司；TNF-α、HMGB-1、SOD和CAT的ELISA试剂盒全部购自 美 国 R&D公 司。Bcl-2、Bax、Caspase-9及GAPDH的引物由上海生工生物工程有限公司合成，反转录试剂盒购自德国Roche公司，荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司。小鼠抗occludin单克隆抗体、兔抗ZO-1单克隆抗体、小鼠抗β-actin单克隆抗体均购自英国Abcam公司。

1.1.3 主要仪器设备 高速低温离心机（日本Kubota公司）；ST-360酶标仪（上海科华实验系统有限公司）；正置光学显微镜（德国Carl Zeiss公司）；荧光定量PCR仪（Thermo公司，美国）；SDS-PAGE凝胶电泳系统及全自动凝胶成像-分析系统（Bio-Rad公司，美国）。

1.2 方法

1.2.1 分组与给药 按照随机数字表法将30只Wistar大鼠随机分为3组：假手术（Sham）组、模型（I/R）组、AS-IV预处理（AS-IV）组，每组10只。适应性饲养7 d，AS-IV组于造模前60 min时，使用浓度剂量为60 mg/kg的AS-IV对大鼠进行灌胃预处理；Sham组和I/R组给予等体积的生理盐水灌胃预处理。

1.2.2 模型制备 按照参照文献[7]制备大鼠肠I/R损伤模型。……