侯天禄，陈天阳，成 扬,3

上海中医药大学附属曙光医院 1.人力资源部； 2.肝硬化科，上海 201203； 3.上海浦东新区传染病医院肝病科

随着人们生活水平的提高，非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)的发病率逐渐升高，发病年龄渐趋低龄化，其可进一步发展为非酒精性脂肪性肝炎、肝纤维化及肝硬化，严重危害人类健康[1-3]。由于NAFLD的发病机制较为复杂，其具体机制仍未明确，但多数学者比较认可“二次打击”学说[4]，所以进一步明确发病机制对于NAFLD的预防和治疗非常重要。

微小RNA(microRNA，miRNA)是一类由20～22个核苷酸构成的单链非编码RNA，它们主要是通过结合在靶基因mRNA的3′非翻译区来降解该基因mRNA或阻碍其翻译[5]，在细胞凋亡、细胞增殖、肿瘤及脂质代谢等方面发挥了调控作用[6]。相关研究表明，miRNA在NAFLD和1型糖尿病这两种肝脏能量代谢过程中发挥了重要的调控作用，并可能参与了NAFLD的病理、生理学过程[7]。课题组前期的研究发现，高脂饮食诱导NAFLD模型小鼠肝脏miRNA表达谱中miR-199a-3p的下调与肝脏脂肪变性有密切关系[8]。本研究以油酸酯和棕榈酸酯诱导Hepa 1-6细胞，建立肝细胞脂肪变性体外模型，观察miR-199a-3p对肝细胞内甘油三酯(TG)含量及Sp1表达的影响，以探讨肝细胞脂肪变性与miR-199a-3p之间的关系，为NAFLD的防治提供潜在的药物靶点。

1 材料与方法

1.1 细胞与试剂小鼠肝细胞Hepa 1-6和NCTC1469细胞株(中国细胞培养中心，中国上海)、质量浓度为100 g/L的胎牛血清(Gibco BRL，Carlsband，CA，USA)、低葡萄糖DMEM(Invitrogen)、油酸酯和棕榈酸酯(HFFA，Sigma，St Louis，MO，USA)、miR-199a-3p模拟物和抑制剂及阴性对照(NC)[GenePharma(上海)]、DharmaFect1(Dharmacon，Lafayette，CO)、miScript Ⅱ RT试剂盒(QIGEN，上海)、磷酸酶抑制剂(Millipore，USA)、Sp1(1∶4 000，Abcam，ab13370)或β-肌动蛋白(1∶2 000，Abcam，ab8227)、二抗(1∶1 000，上海生物科技，中国,#8214)、ECL法(Millipore)。……