岛津Solution工作站的验证

2019-06-17叶棣柏沈丽宫

实验与分析 2019年4期

文/叶棣柏沈丽宫

采用外标一点法、外标曲线法、内标一点法、内标曲线法对岛津的Solution工作站进行验证// 比较手动计算与工作站计算的差别，结果发现，采用一点法测定时，手动计算与工作站计算有差别，需进行修正，采用曲线法进行计算时，手动计算与工作站计算一致，可直接计算。

随着现代仪器分析技术的发展，色谱法由于其准确度、精密度好，逐渐替代了传统的容量分析法和光谱法，广泛应用于食品、药品、石油化工、生命科学等领域。色谱法除了准确度高、精密度好外，还有很多优点，如：分离效率高；分析速度快；样品用量少；灵敏度高；易于自动化等。色谱法的自动化主要通过色谱工作站来完成，色谱工作站是一种辅助色谱仪器采样、收集色谱检测器当中的电压信号数据分析处理的工作站辅助软件。

色谱分析中，采用计算机技术的色谱工作站普遍提高了分析结果的准确度和精密度，基本消除了人为误差，对于分离不理想的色谱峰还可以进行优化处理，弥补分离过程的不足。色谱工作站的自动化计算可以减轻数据分析的工作量，通过输入标准曲线的浓度，建立数据处理的方法，当输入样品的体积、称重、稀释倍数时，就可以得到最终的结果，特别是对于批量处理，更为方便。

实验部分

仪器与试剂

1.仪器

LC-2010高效液相色谱仪（岛津公司），带紫外检测器；

GC-2010气相色谱仪（岛津公司），带FID检测器、顶空进样器；

AL204电子天平（梅特勒公司）。

2.试剂

甲硝唑片、甲硝唑标准品；

紫草油、紫草素标准品；

维生素E、维生素E标准品；

异三十烷、环己烷、紫草素、乙醇、异丙醇、甲醇，均为色谱纯。

Solution工作站的验证

1.外标法（标准一点法）

采用甲硝唑片的含量测定进行验证，测定方法如下：采用高效液相色谱法，C18色谱柱，以甲醇：水（20:80）为流动相，检测波长为320 nm。取本品20片，精密称定，研细，精密称取细粉适量（约相当于甲硝唑0.25 g），置50 mL量瓶中，加50%甲醇适量，振摇使甲硝唑溶解，用50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5 mL，置100 mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，精密量取10 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取甲硝唑对照品适量，精密称定，加流动相溶解定量稀释制成每1 mL中约含0.25 mg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。

2.外标法（标准曲线法）

采用紫草油中紫草素的测定方法进行验证，测定方法如下：采用RP-HPLC法进行测定，以C18为色谱柱，以甲醇-水（85:15）；检测波长为516 nm。取本品0.5 g，精密加入无水乙醇10 mL，采用空气恒温摇床振摇提取，并设置提取温度为40℃，提取转速为200 r/min，提取时间为10 min，取上清液作为供试品溶液，精密量取20 µL，注入液相色谱仪，记录色谱图；另取紫草素标准品，配制成4 µg/mL～0 µg/mL 的一系列标准溶液，同法测定，按外标曲线法以峰面积计算，即得。

3.内标法（标准一点法）

采用维生素E的含量测定进行验证，测定方法如下：采用气相色谱法，HP-1色谱柱，氢火焰离子化检测器，设置柱温为265℃。取正三十二烷适量，加正己烷溶解并稀释成每1 mL中含1.0 mg的溶液，作为内标溶液。另取维生素E对照品约20 mg，精密称定，置棕色具塞瓶中，精密加内标溶液10 mL，密塞，振摇使溶解，作为对照品溶液，取1～3 µL注入气相色谱仪，计算校正因子。取本品约20 mg，精密称定，置棕色具塞瓶中，精密加内标溶液10 mL，密塞，振摇使溶解，作为供试品溶液，取1～3 µL注入气相色谱仪，测定，计算，即得。

表1 甲硝唑对照品校正因子计算结果。

表2 甲硝唑片含量计算结果。

4.内标法（标准曲线法）

采用紫草素中的乙醇残留测定进行验证，测定方法如下：采用顶空气相色谱法，DB-624色谱柱，氢火焰离子化检测器，设置柱温为50℃，设置顶空平衡温度为70℃，保温时间8 min，进样时间0.04 min。取异丙醇适量，加0.1 mol/L的氢氧化钠溶液稀释成每1ml中含10 mg的溶液，作为内标溶液。另取乙醇对照品适量，加0.1 mol/L的氢氧化钠溶液稀释成每1 mL中含10 mg的溶液，作为对照品储备液。取对照品储备液各 0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.8 mL、2 mL，分别加入1 ml内标溶液，加0.1mol/L的氢氧化钠溶液至10 mL，配制成浓度分别为0.1 mg/mL、0.2 mg/mL、0.4 mg/ml、0.8 mg/mL、2.0 mg/mL的溶液。称取样品0.5 g，精密称定，加内标溶液1mL，密塞，加0.1 moL/L的氢氧化钠溶液至10 mL，作为样品溶液，分别测定，按标准曲线法计算，即得。

结果与分析

外标法（标准一点法）

1.校正因子的计算

按上述甲硝唑片含量测定的方法进行测定，配制两份对照品，分别进样5次和2次，采用外标法，设定级别数为2，校准曲线类型为直线，分别采用手动计算和工作站计算校正因子，结果见表1。

由表1可以看出，在计算校正因子时，工作站计算与手动计算结果是一致的。

2.样品含量的计算

按上述甲硝唑片含量测定的方法进行测定，配制两份样品溶液，各进样2次，分别采用手动计算和工作站计算含量，结果见表2。

由表2可以看出，采用外标一点法计算样品含量时，手动计算和工作站计算有略微的差异，这将影响到准确的结果。

3.数据的修正

将数据处理方法另存，在新的数据处理方法中的校准曲线类型改为“手动RF（线性）”，并在组分表中输入由第一个数据处理方法计算出来的平均校正因子，采用此方法对样品进行重新计算，得出的含量值分别为：99.989%、100.078%、100.804%、100.868%，平均值为100.435%。由数据可以看出，采用修正后的方法进行计算，与手动计算的结果一致，数据准确。

表3 紫草素对照品线性方法拟合结果。

表4 紫草油中紫草素含量计算结果。

外标法（标准曲线法）

1.线性方法的拟合

按上述紫草油中紫草素的测定方法进行测定，配制5份对照品溶液，分别进样1次，采用外标法，设定级别数为5，校准曲线类型为直线，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标，分别采用手动计算和工作站拟合线性方法，结果见表3。

表5 维生素E对照品校正因子计算结果。

表6 维生素E含量计算结果。

表7 乙醇对照品校正因子计算结果。

表8 乙醇含量计算结果。

由表3可以看出，采用手动计算和工作站计算得到的拟合曲线基本一致。

2.样品含量的计算

按上述紫草油中紫草素的测定方法进行测定，配制两份样品溶液，各进样2次，分别采用手动计算和工作站计算含量，结果见表4。

由表4可以看出，采用外标曲线点法计算样品含量时，手动计算和工作站计算结果是一致的。

内标法（标准一点法）

1.校正因子的计算

按维生素E含量测定的方法进行测定，配制两份对照品，分别进样5次和2次，采用内标法，设定级别数为2，校准曲线类型为直线，分别采用手动计算和工作站计算校正因子，结果见表5。

由表5可以看出，在计算校正因子时，工作站计算与手动计算结果基本一致的。

2.样品含量的计算

按维生素E含量测定的方法进行测定，配制两份样品溶液，各进样2次，分别采用手动计算和工作站计算含量，结果见表6。

由表6可以看出，采用内标一点法计算样品含量时，手动计算和工作站计算有略微的差异，这将影响到准确的结果。

3.数据的修正

将数据处理方法另存，在新的数据处理方法中的校准曲线类型改为“手动RF（线性）”，并在组分表中输入由第一个数据处理方法计算出来的平均校正因子，采用此方法对样品进行重新计算，得出的含量值分别为：100.583%、99.764%、99.303%、99.524%，平均值为99.793%。由数据可以看出，采用修正后的方法进行计算，与手动计算的结果一致，数据准确。

内标法（标准曲线法）

1.线性方法的拟合

按紫草素中乙醇的测定方法进行测定，配制6份对照品溶液，分别进样1次，采用内标法，设定级别数为6，校准曲线类型为直线，以对照品峰面积/内标峰面积为横坐标，对照品浓度/内标浓度为纵坐标，分别采用手动计算和工作站拟合线性方法，结果见表7。

由表7可以看出，采用手动计算和工作站计算得到的拟合曲线基本一致。

2.样品含量的计算

按维紫草素中的乙醇残留测定方法进行测定，配制两份样品溶液，各进样2次，分别采用手动计算和工作站计算含量，结果见表8。

由表8可以看出，采用内标曲线点法计算样品含量时，手动计算和工作站计算结果是一致的。

讨论

标准一点法

使用外标一点法及内标一点法进行计算时，采用平均校正因子进行计算样品含量，为消除偶然误差，一般要称取对照品两份，其中一份对照品溶液进样5次，考察仪器的进样重复性，另一份对照品进样2次，以7针的校正因子计算平均值，计算样品的含量。而仪器在计算时均采用斜率法进行测定，按7针进行线性拟合后，计算斜率和截距后进行计算，因此有偏差。无论是外标一点法还是内标一点法，对计算方法均需进行校正，在得到平均校正因子后，改为手动校正因子进行计算。