高国强 杨江辉

一份病理报告，就像一份“判决书”。病理诊断可以判定肿瘤的良恶性，肿瘤的原发灶在哪，肿瘤是否需要切除，切多大范围，切得干不干净，是否需要继续扩大切除等，都要靠病理医生的诊断报告来决定。恶性肿瘤患者治疗过程中，该如何用药？需不需要放化疗等与预后密切相关的治疗手段，也要由病理诊断来决定。那么，为什么如此重要的病理报告，在患者看来总是来得很慢，不是“立等可取”呢？

病理诊断是在观测器官的大体（肉眼）改变、镜下观察组织结构和细胞病变特征而做出的疾病诊断，因此它比临床上根据病史、症状和体征等做出的分析性诊断（常有多个诊断或可能性诊断）以及利用各种影像（如超声波、X射线、CT、核磁共振等）所做出的诊断，更具有客观性和准确性。因此，国外将病理医生称之为“医生的医生”。大多数的病理实验室，就像黑匣子一样不为患者所知，那我们就从标本送检到诊断报告来一探究竟……

标本的前处理：固定和取材

简单来说，固定就是把新鲜标本，放入10%福尔马林中浸泡。看似简单，其作用却至关重要，一旦做不好，在后续过程无法弥补。

首先，固定能防止组织自溶和腐败，使细胞内的特殊成分，如一些蛋白质等沉淀或凝固，使其定位在细胞内的原有部位，便于后续观察;其次，组织细胞内的不同物质经固定后产生不同的折光率，对染料产生不同的亲和力，经染色后容易区别;固定剂还有硬化作用，能够使组织硬度增加，便于制片。因此，充分的固定是制作良好切片的前提，一般要求固定液量应为组织总体积的4～5倍，也可10～20倍。组织取下后应立即放入固定液中，大多数组织应固定24小时。

送检来的标本，不一定要全部做成切片观察，取材就是按照检查的目的和要求切取适当大小的组织块，以供制片进行显微镜检查之用。一般要求大小1.5×1.5×0.2～0.3cm为宜，并详细记录取材过程，必要时对标本摄影存档。

“化学加工”：包埋、脱水、透明、浸蜡

包埋就是用包埋剂（通常为石蜡），将组织包埋成块的过程。只有经过包埋，才能使组织达到一定的硬度和韧度，才有利于切成所需要的厚度。石蜡包埋法，是目前病理科最常用的包埋法。

为了让石蜡进入组织，就需要进行脱水和透明。脱水是借某些溶媒置换组织内水分的过程。目前病理科常用梯度酒精，来达到组织脱水的目的。之后需要一种溶剂既能与乙醇混合，又能溶解石蜡，以使石蜡浸入组织块。这种溶剂目前病理科常用二甲苯，因其化学危害较严重，也有用环保透明剂代替的。在这一过程中，因水分被溶剂（如二甲苯）取代，其折射指数接近于组织蛋白的折光指数，组织块变得透亮，因此称之为透明。

最后，组织浸入融化的石蜡，就完成了组织“化学加工”程序。

“手工加工”：切片、染色

接下来就到了制片的关键过程——切片，就是用切片机制作切片的过程。切片机对于一名病理技术员来说，就像枪支之于战士，战马之于骑士。切片要求厚薄均匀，平坦，无褶皱、折叠，无刀痕、裂隙、颤痕。切好的片子放入摊片机中，用载玻片捞起，沥水后放在展片机（烤片机）上烘烤，之后就可以进行脱蜡染色等处理。

苏木素-伊红（H-E）染色，是病理科最常用的染色方法。染色后组织细胞核呈蓝色，细胞质呈红色，便于诊断医师观察组织结构，提供诊断依据。除此之外，为显示细胞内外特殊化学物质（如含铁血黄素、黑色素、淀粉样物质、基底膜等），还需要进行特殊染色;免疫組织化学染色，利用抗原抗体的特异性结合原理和特殊的标记技术，可以对组织和细胞内的特定抗原进行定位、定性或半定量检测;原位分子杂交（FISH）对于肿瘤易感基因检测、肿瘤的预后判断和监测、肿瘤的个体化和靶向治疗等方面应用广泛。染色后的切片用中性树胶封固，至此，切片的制作过程就结束了。

病理医师拿到切片后，在显微镜下进行仔细观察，一组标本，通常要看几十分钟，碰到有问题的还要看了再看。为了保证病理诊断的准确性，自标本送检之日起，一般3～5个工作日发出诊断报告。如需进一步检查（如特殊染色、免疫组织化学、原位杂交等），则需再适当延长时日。