孙蕾 关丽娜 胡姗姗 于建渤

年龄相关性白内障(age-related cataract，ARC)是一种以晶状体混浊为主要特征的眼部疾病，糖尿病、高血压、紫外线和吸烟等是ARC发生和发展的致病因素，而这些因素均可导致机体处于氧化应激状态[1-7]。氧化应激状态下产生的过氧化物积累进一步导致晶状体上皮细胞(lens epithelial cells，LECs)的损伤，出现晶状体混浊。因此，氧化应激被认为是ARC的主要发病机制[8-9]。低氧诱导因子-1α(hypoxia

inducible factor-1α，HIF-1α)是低氧应激反应的关键转录调节因子，氧化应激会导致HIF-1α的表达发生变化，HIF-1α在心肌、肝、肺等组织的氧化应激反应中通过不同的机制发挥作用[10-12]。解剖结构上，晶状体属于无血管组织，人LECs的天然生存环境处于缺氧状态，而缺氧会导致HIF-1α的合成增加[13]。目前，尚未有HIF-1α与ARC相关的报道。本研究基于实验前期已建立的氧化应激诱导SRA01/04凋亡的细胞模型，以及通过建立自然衰老的ARC小鼠模型，并结合临床收集ARC患者前囊膜标本为基础，检测HIF-1α在ARC中的表达情况，以及通过本研究为ARC的治疗提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂与仪器 体积分数10%胎牛血清、100×103U·L-1青霉素和100 g·L-1链霉素(美国Gibco公司)，DMEM培养液、磷酸盐(PBS)缓冲液(美国HyClone公司)，6孔培养板(美国CoStar公司)，细胞冻存瓶、离心管(美国Corning公司)，鼠抗人β-actin单克隆抗体(美国Sigma公司)，兔抗人HIF-1α多克隆抗体(美国Abcam公司)，山羊抗小鼠IgG(G+L)二抗、山羊抗兔IgG(G+L)二抗、兔二步法试剂盒、DAB显色试剂盒、柠檬酸盐修复液、PBS缓冲液粉末、阳离子防脱玻片、中性树胶(北京中杉生物技术有限公司)，发光试剂盒(美国Millipore公司)。电热恒温干燥箱(上海精宏实验设备有限公色)，漂片仪(常州市郝思琳医用仪器有限公司)，轮转切片机、细胞培养箱(美国Thermo Fisher公司)，离心机(美国Sigma公司)。……