朱宇航，黄思洋，陈华保，常小丽，闫芳芳，张宗锦，龚国淑*

1. 四川农业大学农学院，成都市温江区惠民路211 号 611130

2. 四川省烟草公司攀枝花市公司，四川省攀枝花市龙珠路31 号 617099

烟 草 赤 星 病 [Alternaria alternata（Fries）Keissler]是一种真菌性病害，具有潜育期短，爆发快等特点[1-2]。在温湿度适宜的条件下，短时间内可大面积流行[3]。烟草赤星病在四川省各大烟区均有发生，攀枝花-凉山烟区发生最为严重，烟叶损失高达30%以上，给烟叶生产造成巨大损失。目前，烟草赤星病的防治主要以化学防治为主，药剂主要为菌核净和多抗霉素[4-6]。由于长期、大量使用菌核净和多抗霉素，导致烟草赤星病菌产生抗药性，田间防治效果明显降低[7-9]。因此，新药剂的筛选已迫在眉睫。黄艳飞等[10]发现氟硅唑、醚菌酯、嘧菌酯等对烟草赤霉病菌菌丝生长的抑制效果显著。陈杰等[11]通过田间试验发现10%苯醚甲环唑水分散粒剂、30%肟菌酯·戊唑醇悬浮剂、30%苯醚甲环唑·丙环唑悬浮剂和32.5%苯醚甲环唑·嘧菌酯悬浮剂对烟草赤星病具有显著的防治效果。

氟啶胺、啶氧菌酯、啶酰菌胺、嘧菌环胺、噁唑菌酮5 种药剂是国内外生产中广泛使用的低毒、低残留杀菌剂[12-22]。其中，氟啶胺和嘧菌环胺对柑橘链格孢褐斑病（A. alternata）和灰霉病有较好的田间防效[12-13，18]，啶酰菌胺对番茄早疫病（A.solani）和大豆菌核病（Sclerotinia sclerotiorum）的防治效果也较好[14，19]，啶氧菌酯对辣椒炭疽病和葡萄霜霉病有特效[15-16]，噁唑菌酮能够很好地防治疫病和黄萎病[17，22]。但这5 种药剂用于烟草赤星病的防治研究鲜见报道。为此，研究氟啶胺、啶氧菌酯、啶酰菌胺、嘧菌环胺、噁唑菌酮等5 种原药及其所对应的杀菌剂对烟草赤星病菌的室内毒力和田间防治效果，旨在筛选出新的、高效的杀菌剂用于烟草赤星病的防治。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验地位于四川省攀枝花市仁和区平地镇（北纬N26°15′44.26″，东经E101°48′28.26″），海拔2 036 m，属于南亚热带河谷气候。干湿季分明，每年6～10 月降雨集中，日照时间长，有效积温高。

试验地土壤为紫色岩风化物发育的水稻土，微酸。地势平坦、肥力均匀，历年种植烟草，为烟草赤星病常发区。2017 年，烟草旺长至成熟期间，平均气温20.9 ℃/月，平均降水量＞300 mm/月。

供试药剂。①供试原药（室内实验）：98%氟啶胺、95%啶氧菌酯、95%啶酰菌胺、95%嘧菌环胺、95%噁唑菌酮，均由四川农业大学无公害农药实验室提供。②供试杀菌剂（田间试验）的具体名称、剂型、施药浓度及生产厂家见表1。施药浓度采用厂家推荐的最佳浓度。

表1 田间供试杀菌剂Tab.1 Fungicides used in field experiments

供试烟草品种为云烟87，易感烟草赤星病。由四川农业大学雪茄工程技术研究中心提供。烟草赤星病菌的菌株编号为YC-PZH，对烟草具有强致病性，分离自四川省攀枝花市烤烟种植区，该地区从未使用过本文中的供试药剂。

1.2 方法

1.2.1 室内毒力测定

采用菌丝生长速率法[23]进行供试药剂的室内毒力测定。将5 种原药分别溶于丙酮，配置成10 g/L 母液备用（现配现用）。用0.1%吐温80 的无菌水将5 种原药母液按下列梯度进行稀释，其中啶氧菌酯、啶酰菌胺和噁唑菌酮的浓度梯度均为0、62.5、125.0、250.0、500.0 和1 000.0 mg/L，氟啶胺和嘧菌环胺的浓度梯度均为0、6.25、12.50、25.00、50.00 和100.00 mg/L。空白对照：在含0.1%吐温80的无菌水中加入丙酮（0.1%吐温80 的无菌水∶丙酮=100∶1，体积比）。将不同浓度的5 种原药母液加入45 ℃的PDA 培养基中（PDA 培养基∶原药=9∶1，体积比），制备成含药PDA 培养基。其中，啶氧菌酯、啶酰菌胺和噁唑菌酮的浓度梯度均为0、6.25、12.50、25.00、50.00 和100.00 mg/L；氟啶胺和嘧菌环胺的浓度梯度均为0、0.625、1.250、2.500、5.000和10.000 mg/L。

PDA 培养基：马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂粉10 g，水1 L。

将烟草赤星病菌菌株YC-PZH 用PDA 培养基暗培养（25 ℃）约7 d，用打孔器在菌落边缘等距离切取直径5 mm 的菌饼。将菌饼接种于不同浓度的含药PDA 培养基和对照PDA 培养基（直径10 cm）中，每个处理重复3 次。接菌后，将平板置于25 ℃恒温培养箱中，暗培养7 d 后，采用“十字交叉法”测量菌落直径，计算菌丝生长抑制率。

1.2.2 田间试验

试验设计。采用随机区组进行田间试验，试验田四周设保护行。按攀枝花市优质烟叶生产技术[24]进行田间管理。选用5 种杀菌剂，以清水为空白对照，共6 个处理，每个处理3 次重复。共18个小区，每个小区面积为100 m2。

田间调查。采用对角线5 点取样法进行调查。每点随机选取5 株烟草，每株烟草调查5 片完整烟叶（从下往上），剔除萎蔫、破损烟叶。按照杀菌剂说明书上的浓度要求，对烟草进行施药处理。分别于2017 年7 月29 日、8 月5 日和8 月12 日施药，共3 次。在第1 次施药前、第1 次施药后7 d 和第3次施药后7 d 调查目标烟叶赤星病的发病情况。

烟草赤星病的调查分级标准（以叶片为单位分级调查）按烟草病虫害分级及调查方法[20]进行。病情指数[25]和防治效果[26]的计算方法：

式中：CK0为空白对照施药前病情指数；CK1为空白对照施药后病情指数；PT0为药剂处理施药前病情指数；PT1为药剂处理施药后病情指数。

1.3 数据统计

运用SPSS 19.0 软件对数据进行分析，以药剂质量浓度的对数值为横坐标、抑制率对应的几率值为纵坐标进行作图，得到毒力回归方程及有效抑制中浓度（EC50）值。再用Duncan（0.05）比较各试验处理之间的差异显著性。

2 结果

2.1 不同药剂对烟草赤星病菌的室内毒力测定

由图1 和表2 可知，在测试浓度范围内，5 种药剂均能在一定程度上抑制烟草赤星病菌菌丝的生长，但毒力存在明显差异，毒力由强到弱依次为98%氟啶胺＞95%嘧菌环胺＞95%啶氧菌酯＞95%啶酰菌胺＞95%噁唑菌酮。其中98%氟啶胺抑制效果最好，EC50为0.138 2 mg/L；其次为95%嘧菌环胺，EC50为3.568 9 mg/L；95%噁唑菌酮抑制效果最差，EC50为30.098 3 mg/L。毒力回归方程的斜率代表药剂对病菌的敏感性，斜率越大，敏感性越高[27]。从表2 可知，5 种药剂对烟草赤星病菌的敏感性存在差异，其中95%嘧菌环胺对烟草赤星病菌最为敏感，95%啶酰菌胺最不敏感，两者斜率相差7.713 倍。

图1 10 mg/L 浓度下5 种药剂的抑菌效果Fig.1 Inhibitory effects of five fungicides at concentration of 10 mg/L

2.2 不同杀菌剂对烟草赤星病菌的田间防效试验

由表3 可知，5 种杀菌剂对烟草赤星病均有一定的防治效果。第1 次施药后7 d，不同杀菌剂处理之间的病情指数差异不显著，但防治效果差异显著，而且病情指数增长幅度相比对照有所下降，说明病害发生得到了初步控制。第3 次施药后7 d，不同药剂处理病情指数相比对照显著下降，说明连续施药后病情得到了有效控制，病害明显减轻。各药剂之间平均防效差异显著，防效由强到弱依次为50%氟啶胺SC＞22.5%啶氧菌酯SC＞62%嘧菌环胺WG＞52.5%噁酮·霜脲氰WG＞50%啶酰菌胺WG。其中50%氟啶胺SC 的防治效果最好，为70.44%；其次是22.5%啶氧菌酯SC 和62%嘧菌环胺WG，防效分别为64.26%和63.09%；50%啶酰菌胺WG 防治效果最差，为39.53%。从施药到调查结束，试验田未发生任何异常情况，各杀菌剂处理后对烟草均未产生药害，表现安全。试验田收成良好，烟叶品级较高。经四川省烟草公司攀枝花市公司和四川省烟草专卖局质量监督检测站抽检后，在烟叶上未发现5 种杀菌剂残留超标。

表3 5 种杀菌剂对烟草赤星病的田间防治效果①Tab.3 Control efficacy of five fungicides on tobacco brown spot in fields

3 讨论

目前，化学防治仍是烟草赤星病的主要防治途径，菌核净和多抗霉素曾是很多烟叶产区的主推药剂，但由于生产上长期高浓度、高频率的使用，已导致病原菌对菌核净和多抗霉素产生了较严重的抗药性[4-9]。本研究中，测定了5 种常用药剂对烟草赤星病菌（A. alternata）的毒力及其田间防治效果。根据毒力测定和田间防效的数据，筛选出能有效防治烟草赤星病菌的两种药剂：氟啶胺和嘧菌环胺。氟啶胺属于吡啶胺衍生物，是线粒体氧化磷酰化解偶联剂，为广谱高效的保护性杀菌剂，对链格孢属（Alternaria）、疫霉属（Phytophthora）和核盘菌属（Sclerotinia）真菌具有显著的杀菌效果[28-30]。在国外使用多年未见抗药性报道，且与其他药剂无交互抗性，对易产生抗药性的病菌具有良好防效[30]。嘧菌环胺属于苯胺基嘧啶胺类化合物，是蛋氨酸生物合成抑制剂，能有效抑制病原菌分泌侵染所需的酶类，起到保护作用[31-32]。且嘧菌环胺同三唑类、苯基吡咯类、咪唑类、二酰酸亚胺类、吗啉类杀菌剂均无交互抗性，是具有保护、治疗、叶片穿透及根部内吸活性的高效安全杀菌剂[31，33]。因此，氟啶胺和嘧菌环胺不仅可以单独施用，也可同其他药剂混用或复配，兼治多种病害。但有关氟啶胺和嘧菌环胺与其他药剂复配用于防治烟草病害还需进一步研究。

4 结论

①98%氟啶胺和95%嘧菌环胺对烟草赤星病菌有强烈的抑制作用，EC50分别为0.138 2 和3.568 9 mg/L。②在推荐的最佳浓度下，3 种杀菌剂（50%氟啶胺SC、22.5%啶氧菌酯SC 和62%嘧菌环胺WG）对烟草赤星病的田间防治效果较好，分别为70.44%、64.26%和63.09%。③综合室内毒力和田间效果的数据，氟啶胺和嘧菌环胺能有效控制病害、使用安全、无抗药性风险，推荐用于烟草赤星病的防治。