宋昌霞，魏克强

（山西大学生命科学学院，山西 太原 030006）

近年来，我国水域环境的污染状况日益严峻，重金属镉是典型的污染物之一，能对水生动物造成氧化应激、免疫损伤等毒性效应，严重危害了水生动物健康[1-4]。克氏原螯虾（Procambarus clarkii）是我国主要的淡水养殖品种之一，还是一种潜在的水质环境污染的指示生物[5]。肝胰腺是甲壳动物重要的免疫和解毒器官[6-7]。研究表明，NF-κB 是进化保守的氧化还原敏感的转录因子，其家族成员p65（RelA）在天然免疫反应中具有重要作用[8]。目前还发现，在甲壳动物等低等无脊椎动物细胞内也存在该蛋白的类似物，其mRNA 主要在肝胰腺表达和分布[9]。

本研究以亚致死浓度的Cd2+为胁迫因子，利用免疫组化法（IHC）分析了不同浓度Cd2+对克氏原螯虾肝胰腺NF-κB p65 表达的影响，旨在为甲壳动物的免疫毒理学研究提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 材料

健康克氏原螯虾（体长为（9±0.5）cm，体质量为（21.2±4.2）g），购于太原市五龙口水产市场。试验前于曝气充足的玻璃缸中暂养7 d，水温为（16±1）℃，pH 值为 6.5±0.2，试验前 24 h 不再喂食。

1.2 主要试剂与仪器

主要试剂有多聚甲醛、无水乙醇、二甲苯、石蜡、苏木素、伊红、氨水、中性树胶、柠檬酸等，均为国产分析纯；NF-κB p65 多克隆抗体（Proteintech，武汉），兔IgG SABC 免疫组化试剂盒（博士德，武汉），DAB 试剂盒（索莱宝，北京）。

仪器主要有石蜡切片机（Leica RM2255，德国），CO2恒温培养箱（HH.CP-7 型，上海），光学显微镜（Olympus BX51，日本）等。

1.3 试验方法

1.3.1 染毒与取样 采用静态水质接触染毒法。确定 96 h 半致死浓度（LC50≈42 mg/L）后，随机分为3 个处理组：健康对照组和1.0，5.0 mg/L Cd2+染毒组，每组6 只。染毒96 h 后，随机取3 尾，置于冰上麻醉，解剖取肝胰腺组织，4%多聚甲醛固定48 h。……