张洪涛 ，赖岳晓 ，黎巧萍 ，田素英 ，3 ，刘佩沂 ，曾永成 ，李 诗

（1.广东省中山市黄圃人民医院，广东 中山 528429； 2.广东药科大学，广东 广州 510006； 3.广东省实验教学示范中心，广东 中山 528458）

英花伤宁口服液为中山市黄圃人民医院名老中医临床验方，由山银花、丹参、黄连、徐长卿等15味中药组方，具有化瘀、消肿、凉血、止痛等功效，临床用于治疗骨折、关节脱臼、扭挫伤肿胀引起的疼痛，疗效确切。为更好地开发应用传统名优验方，本研究中通过抗炎和抗菌试验探讨该制剂的消肿、止痛等作用机制。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

动物：SPF 级 KM 小鼠 100 只，雄性，体质量（20±2）g，购于广东省实验动物中心，动物生产许可证号为SCXK＜粤＞2014-1002，饲养于广东药科大学实验室屏障环境饲养间，动物使用许可证号为SCXK＜粤＞2012-0125，饲养期间自由饮水摄食，室温控制在20℃左右。

菌株：金黄色葡萄球菌（ATCC25923）、铜绿假单胞菌（ATCC27845）、大肠杆菌（ATCC25922）、痢疾杆菌 （ATCC27853）、变 形 杆菌 （ATCC27854）、伤 寒 杆菌（ATCC25963），由广东药科大学中山校区实验中心提供。

试药：英花伤宁口服液（中山市黄圃人民医院，批号为20170801，规格为每支 90 mL）；阿司匹林肠溶片（拜耳医药保健有限公司，批号为J20170078，规格为每片100 mg）；普鲁卡因青霉素注射液（山东吉星动物药业有限公司，批号为 20170801，规格为每支 80万U）；注射用硫酸链霉素（山东聚德药业有限公司，批号为20170801）；营养琼脂、肉汤培养液均购自天津市福星化学试剂厂。

1.2 方法

1.2.1 抗炎试验

小鼠棉球肉芽肿试验：将50只小鼠分为模型组（A组，等体积0.9%氯化钠溶液）、黄连提取物组（B组）和英花伤宁口服液高、中、低剂量组（C1组，C2组，C3组，37.6，18.8，9.4 g ／kg），每组 10 只。按成人用量（每60 kg体质量 270 mL）根据体质量换算法计算小鼠给药量，灌胃体积为 每10 g体质量0.2 mL。给予小鼠腹腔注射10%水合氯醛溶液（每10 g体质量0.03 mL），待其进入麻醉状态后，在每只小鼠左侧腋下涂抹碘酒消毒，再用医用酒精脱碘，皮下部位用手术剪剪开1个小口，用眼科镊子将1个精密称定的灭菌棉球（青霉素和链霉素混合液浸泡，烘干）从切口处植入皮下，随即缝合皮肤，以建立肉芽肿模型。建模成功后各组小鼠灌胃给药，每天1次，连续8 d。末次给药2 h后，脱颈椎处死小鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，置烘箱中60℃烘干，称定质量，减去原质量，即得肉芽肿的净质量[1-2]。

醋酸致小鼠腹腔毛细血管炎试验：分组与给药同上。连续给药7 d，末次给药30 min后，给予小鼠尾部静脉注射0.5%伊文思蓝0.9%氯化钠溶液（每10 g体质量 0.1 mL），随即腹腔注射 0.6% 冰醋酸 0.9% 氯化钠溶液（每 10 g体质量 0.1 mL），20 min后脱臼处死，轻揉小鼠腹部，在小鼠下腹部剪开1个小口，用注射器吸取6 mL 0.9%氯化钠溶液，分数次注射入小鼠腹腔中洗涤，收集洗涤液4 mL，加0.9%氯化钠溶液稀释至10 mL，3 000 r／min离心15 min，取上清液，于590 nm波长处测定吸光度[1-2]。

1.2.2 抑菌试验

抑菌圈测定：分为空白对照组（A组，灭菌水）、黄连提取物（B组）和英花伤宁口服液高、中、低剂量组（C1组，C2组，C3组）。将各菌种置培养基试管中。在培养箱内、于 37℃下培养 24 h，含菌量为 5～10 cfu／mL。吸取100 μL菌液均匀涂布在营养琼脂平板上，取直径6 mm的无菌圆形纸片，分别吸取各组药液（每片20 μL），均匀分布在营养琼脂平板表面。于37℃下培养24 h后测量抑菌圈直径。

最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC）测定：采用连续倍比稀释法[3]。取试管9支，设置第1～7支药液质量浓度分别为每 1 mL 相当 0.235，0.118，0.058，0.029，0.014，0.007，0.004 g 生药。第 8 支加入 1 mL 苯甲酸灭菌溶液（0.1 g苯甲酸溶于1 000 mL蒸馏水），摇匀，作阳性对照。第9支不加试剂，作空白对照。将贮藏菌各取少许分别接种于平板培养基上，37℃培养24 h，活化菌种。挑取单菌落接种与液体培养基上，培养24 h，用灭菌0.9%氯化钠溶液稀释至浓度相当于0.5麦氏比浊管。浊度相同后，稀释1 000倍；各取0.1 mL分别加入各稀释管中，置37℃培养箱中培养24 h，观察各稀释管的变化。

1.3 统计学处理

采用SPSS 19.0统计学软件分析，计量资料以 X±s表示，行 F检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 抗炎试验

与A组比较，B组和C1，C2组小鼠肉芽质量显著减小，腹腔液体中吸光度显著减小（P＜0.05）。详见表1。

2.2 抑菌试验

低、中、高质量浓度的英花伤宁口服液对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌的抑菌作用明显；尤其是高剂量对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌作用强于80%乙醇黄连提取液。结果见表2。

英花伤宁口服液对金黄色葡萄球菌抑菌作用最强，MIC 为 0.014 g／mL(生药)；对伤寒杆菌、铜绿假单胞菌次之，MIC 为 0.058 g／mL(生药)；对大肠杆菌作用最差，MIC 为 0.118 g／mL(生药)。结果见表 3。

表1 各组小鼠肉芽质量与吸光度比较（X±s，n＝10）

表2 各组抑菌结果比较（抑菌圈直径，mm）

3 讨论

软组织损伤属中医学“伤筋”范畴，究其病机，均属各种原因所致局部气滞血瘀、脉络不和。《圣济总录·折伤门》云：“若因伤折内动经络，血行之道不得宜通。瘀积不散，为肿为痛。”[4]中医治疗多以活血化瘀为主，效果理想，且避免了长期服用传统非甾体类抗炎药导致多种不良反应的产生[5-6]。

英花伤宁口服液方中，山银花具有抗炎、抗菌、调节血糖等多种药理作用[7]；丹参作为临床最常用活血化瘀类中药，主要功能为改善微循环、抗炎，其抗炎机制众多，既与直接抗菌作用有关，又与其调节机体免疫功能，从而提高机体抗菌能力有关[8]；黄连的抗菌谱较广，主要成分小檗碱、黄连碱和巴马汀的抗炎活性较好[9]；徐长卿具有镇痛、抗炎的作用[10]，临床用于治疗各种痛症，对多种炎性模型均有抑制作用，其所含丹皮酚能对抗炎性介质[11]。方中的其他成分也有一定抗炎、抗菌、镇痛作用，故全方有消肿止痛、活血化瘀功效。

表3 英花伤宁口服液 MIC和 MBC测定结果

本研究结果显示，37.6 g／kg 和 18.8 g／kg 剂量的英花伤宁口服液能明显抑制棉球肉芽炎性肿胀及冰醋酸所致炎性过程中毛细血管通透性，表明对慢、急性炎性动物模型有抑制作用。对于一些常见细菌，该口服液均有不同程度的抑制作用，其中以金黄色葡萄球菌作用较强，这可能与组方中的山银花、黄柏和蒲公英等的抗菌谱有关[12-14]。

综上所述，英花伤宁口服液具有一定的抗炎、抗菌作用，但对于其起效浓度、药效物质基础和机制还有待进一步研究。参考文献：

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[2]赖岳晓，刘佩沂，田素英，等.金番止泻胶囊不同比例提取物药效对比研究[J].中医学报，2016，31（8）：1139-1141.

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