那存乌力吉，达嘎呼

0 引言

丙戊酸(Valproic acid，VPA)是一种支链短链脂肪酸，是治疗癫痫和双相情感障碍的常用药物之一[1]。在治疗癫痫中，VPA是一种有效的广谱抗惊厥药，用于治疗原发性全身强直-阵挛性、无症状和部分性癫痫[2]。VPA具有严重的不良反应，如肝毒性[3]、骨髓抑制[4]、骨细胞产生减少和骨软化。其中肝毒性主要表现为肝细胞脂肪变性及细胞凋亡[5]，VPA肝毒性的机制尚不清楚[6]。此外，VPA是一类新型组蛋白去乙酰化酶(Histone deacetylases，HDACs)抑制剂，促进组蛋白乙酰化，使染色质采取松散的结构，促进各种转录因子的结合，影响基因的转录与表达。研究认为，VPA的HDAC抑制活性与多种癌症相关基因的表达增加有关，可抑制细胞生长和增加细胞凋亡[6]。相关研究发现，VPA处理肝细胞后，AKT1基因表达改变明显[7]，而且AKT1的下调与线粒体异常有关。线粒体异常是引起细胞凋亡的重要机制之一。本研究探讨VPA是否通过影响PI3K/AKT/mTOR通路来影响线粒体功能，从而引起细胞凋亡，并使用HDAC抑制剂曲古抑菌素A(Trichostatin A，TSA)研究这种效应是否与其HDAC抑制剂活性相关，为了解和防治VPA肝毒性提供理论依据。

1 材料

1.1 细胞株 HepG2人肝癌细胞系，购于上海中科院，37 ℃、5%CO2培养箱中常规培养，培养液为含10%胎牛血清的RPMI-1640完全培养基。

1.2 实验试剂 胎牛血清，RPMI-1640(GIBICO，美国)，MTS试剂盒(Promega，美国)，DMSO，TSA(Sigma，美国)，抗p-PI3K，PI3K，p-AKT，AKT，p-mTOR，mTOR，LC3B，p62/SQSTM1，pre-caspase-3，cleaved-caspase-3，Bcl-2，Bax，GAPDH抗体(Cell signaling technology，美国)，抗兔，抗小鼠，抗山羊HRP二抗(中杉金桥，中国)，ECL试剂盒(Thermo Fisher，美国)，JC-1试剂盒(碧云天，中国)，Annexin V-FITC/PI细胞凋亡双染试剂盒(Becton，Dickinson and company，美国)。

2 方法

2.1 处理与分组 取对数生长期HepG2细胞，种植于细胞培养板。VPA浓度为0、100、500 μmol/L，1、5、10 mmol/L；TSA浓度为0、50、100、500 nmol/L，1、5 μmol/L。处理时间为24 h。……