冯顶丽，卓丽丹，芦 笛，李 红，郭红延

人诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSC)是由日本 Yamanaka 研究小组于2006 年首次成功创建[1]，随后，国内外多家实验室通过转染外源特定的基因组合来诱导成体细胞向 iPSC的重编程。iPSC类似于胚胎干细胞，具备基因多样性，能自我更新并分化成为多种类型的组织和体细胞。另外，iPSC的诞生克服了胚胎干细胞在临床应用时涉及的移植免疫排斥与伦理问题，且成瘤率较低[2,3]。加之，与胚胎干细胞比较iPSC具有来源广泛的巨大优势，任何一个成体细胞经重编都有获得iPSC的潜能[4]，遗传多样性和患者特异性细胞数量呈指数级增长，扩展的细胞库有利于新药在目标人群样本中的测试，从而有助于精准医学的发展[5]。另外，多能干细胞用于诱导产生人体功能性细胞和功能性类器官，构建研究模型。如iPSC经3D培养产生胆管细胞[6]，心肌细胞[7]，肾脏[8]，胃[9]，人体肠道器官[10]，人肺类器官[11]，神经构建体[12]等。这种潜能有利于对遗传性疾病的研究与治疗[13]，因此具有重要的临床应用价值。iPSC具有向三胚层细胞分化的能力，本研究旨在验证诱导iPSC为中胚层的成骨细胞、成软骨细胞及外胚层神经细胞的技术方法。

1 材料与方法

1.1 材料 iPSC购自上海中国科学院干细胞库(干细胞库编号为SCSP-1302，细胞描述为将人皮肤细胞诱导成IPS细胞，重编程转录因子为OCT4、SOX2、KLF4、MFC)。mTeSRTM1 培养液 (Stem cell, 加拿大)；Matrigel 基质胶 (BD, 美国)；DMEM高糖基础培养液、DMEM/F12、胎牛血清(FBS)、Dispase、 B-27补充剂(50X)、N-2补充剂(100X)、MEM非必需氨基酸溶液100X (Gibco)； ITS+1、抗坏血酸2-磷酸、β-甘油磷酸钠、碱性磷酸酶检测试剂盒、地塞米松、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇(Sigma，美国)；……