韦云莹，赵燕，庄金伟，李江，帕米拉·乃则木丁，陆祎晟，艾连中，熊智强

(上海理工大学 医疗器械与食品学院，上海食品微生物工程研究中心，上海，200093)

发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)是一种异型发酵乳酸菌，在发酵食品的制作和功效方面具有特殊作用，还具有众多益生功能[1-3]。目前对发酵乳杆菌益生作用研究主要集中在胃肠道的耐受性、抗菌活性、降胆固醇、增强免疫活性[4-5]、抗氧化、缓解肝脏和肠道损伤等方面[6]。这些益生功能与发酵乳杆菌相关基因的调控密不可分，而基因的调控和功能研究依赖于菌株遗传操作的建立和发展。因此，确定最佳电转化条件是建立发酵乳杆菌遗传体系的前提。发酵乳杆菌AR497是本实验室前期筛选出的1株能有效改善小鼠肠炎的乳酸菌，为研究其抗炎机理和解析抗炎相关基因，建立高效的电转化方法至关重要。

由于目前报道的乳酸菌电转化方法不能成功应用于AR497中，本研究首先建立了发酵乳杆菌AR497的电转化方法，采用Plackett-Burman试验筛选出电转化方法中的关键因素，利用响应面试验对关键因素进行优化，确定最优电转化条件。

1 材料与方法

1.1 材料与培养基

1.1.1 菌株与质粒

实验所用的菌株与质粒如表1所示。

1.1.2 培养基

MRS培养基：用于AR497的活化、培养和活菌计数。LB培养基：用于E.coli的培养。MRSMC1复苏培养基：含有0.8 mol/L山梨醇的MRS培养基。MRSMC2复苏培养基：含有0.8 mol/L山梨醇，2 mmol/L CaCl2，20 mmol/L MgCl2的MRS培养基。MRSMC3复苏培养基：含有0.8 mol/L蔗糖的MRS培养基。MRSMC4复苏培养基：含有0.8 mol/L蔗糖，2 mmol/L CaCl2，20 mmol/L MgCl2的MRS培养基。

1.2 发酵乳杆菌AR497感受态制备方法

MRS液体培养过夜，3%接种量接种至含质量浓度20 g/L甘氨酸的MRS液体培养基至OD600为0.3～0.4。……