宋伶俐，李勇霖，王 强，赵 征，沈元朝，王广泽，张 玥，许小琴

（扬州大学兽医学院，江苏扬州225009）

七子白组方始载于《太平圣惠方》[1]中，后见于《御药院方》[2]，在古代深得后宫佳丽的喜爱，用此方来美肤养颜，可使面色光悦、肤若凝脂；时至今日，七子白仍被广大女性喜爱，也不断地被人们进行创新[3]，各种中药美白配方中也能见到此方中的中药。王冬艳[4]等人用改良七白膏进行美白功效探究，发现七白膏能降低血清中酪氨酸酶含量；在临床上治疗女性黄褐斑的临床观察中[5]，七子白治疗有效率高达91.67%，梁伟等人也研究发现，七白颗粒对女性气滞淤血型黄褐斑有明显的疗效[6]。

为了正确地评价七子白的安全性，本试验选取了白色大鼠作为研究对象，进行了皮肤急性毒性试验、刺激试验和过敏试验，为临床提供一些理论依据。

1 材料与方法

1.1 受试药物：白术、白芷、白茯苓、白芍、白僵蚕、白蔹、白芨（均采购于毫州市伯世信主药饮片有限公司），经扬州大学兽医学院中兽医教研室许小琴教授鉴定。所有药物一起粉碎成粉末，过180 目筛子，备用。

1.2 主要试剂：2，4-二硝基氯代苯（上海化成工业发展有限公司），凡士林。

1.3 主要器材：剃须刀，电子秤，医用胶布、纱布。

1.4 受试动物：健康Wistar 白色大鼠，雌雄各半，由扬州大学比较医学中心提供。

2 试验前准备

2.1 药物准备：七子白用蒸馏水作为溶剂，将1.1 中的七子白粉末配制成0.5g/ml 的膏状药物备用；2，4-二硝基氯代苯配制成1%和0.1%的浓度备用。

2.2 动物皮肤准备 完整皮肤组：于给药前24 小时，用剃毛刀将大鼠背肌对称两侧去毛，去毛面积约为4×4cm，若在剃毛过程中皮肤有损伤，则不能参与完整皮肤组。

破损皮肤组：在完整皮肤组的基础上进行操作，剃毛区用酒精消毒，再用磨砂纸打磨，以渗血为度。

3 试验方法 参考《中药药理研究方法学》[7]第3 版的方法学，对七子白进行皮肤急性毒性试验、刺激试验和过敏试验。

3.1 皮肤急性毒性试验

3.1.1 试验分组：将30 只大鼠随机分为5 组，每组6 只(雌雄各半)，Ⅰ组为空白组、Ⅱ组为七子白完整皮肤高剂量组，Ⅲ组为七子白完整皮肤低剂量组，Ⅳ组为七子白破损皮肤高剂量组，Ⅴ组为七子白破损皮肤低剂量组。

3.1.2 给药剂量及方法 给药剂量Ⅰ组：凡士林；Ⅱ组和Ⅳ组：每只大鼠给予5g 七子白配制成的膏剂，Ⅲ组合Ⅴ组：每只大鼠给予1g 七子白配制的膏剂； 给药方法为将各组对应药物涂于剃毛区，用一层油纸两层纱布，再用无刺激的医用胶布固定（防止大鼠互相舔食以及让药物更好接触皮肤），给药24h 后洗去药物，给药一次。

3.1.3 观察指标： 于洗去药物后1h、24h、48h、72h 至第七天，每天仔细观察大鼠运动行为、皮肤情况、有无死亡及全身毒性反应，若有死亡需剖解观察脏器是否有病理变化。

3.2 皮肤刺激试验

3.2.1 试验动物分组： 将30 只大鼠随机分为5 组，每组6只(雌雄各半)；A 组为空白组，B 组为七子白完整皮肤组，C组为七子白破损皮肤肤，D 组为阳性药物完整皮肤组，E 组为阳性药物破损皮肤组.

3.2.2 给药剂量及方法：A 组：给与凡士林，B 组和C 组：给予1g 七子白粉制成的膏剂，D 组和E 组：给予1%的2，4-二硝基氯代苯0.5ml。

给药方法 单次刺激试验：给药一次，给药后用一层油纸和两层纱布胶带固定，给药24h 后用温水洗去药物，观察记录给药后1、24、48、72h 小时至第7 天。

多次刺激：按单次刺激试验方法给药，连续给药7d，末次给药后洗去药物并观察7d。

3.2.3 观察指标：单次刺激和多次刺激给药后，记录大鼠背部皮肤每日的红斑及水肿情况，记录红斑水肿发生时间大鼠数量及消退时间。按表3-1进行皮肤刺激评分，计算给组大鼠的刺激平均值，按表3-2评价各组药物对皮肤的刺激强度。并仔细观察实验期间的大鼠运动行为、皮肤情况、有无死亡及全身毒性反应，若有死亡需剖解观察脏器是否有病理变化。

3.3 皮肤过敏试验

3.3.1 试验动物分组： 将18 只大鼠随机分为3 组，每组6只（雌雄各半），M 组为空白组、N 组为七子白组、L 组为阳性药物组。

表3-1 皮肤刺激反应评分标准表

表3-2 皮肤刺激强度评价

3.3.2 给药剂量及方法：M 组： 给予凡士林，N 组： 给予1g七子白粉配制成的膏剂，L 组： 给予1%的2，4-二硝基氯代苯0.5ml。

给药方法：按给组对应药物涂于剃毛区，用一层油纸两层纱布以及无刺激医用胶布固定，持续6h，在第7 天、第14 天分别用同样方法重复一次，于末次致敏14 天后进行激发接触(M 组和N 组同3.3.2，L 组为0.1%的2，4-二硝基氯代苯0.5ml)，6h 后洗去药物。

3.3.3 观察指标：观察大鼠是否有哮喘、站立不稳或休克等严重的全身过敏反应，按表3-3记录给皮肤过敏反应并计算反应平均值，根据表3-4计算各组药物致敏率并判断致敏强度

3.4 统计学分析

采用SPSS 21.0 软件对试验数据进行统计分析，试验数据以“平均值±标准误”表示，采用F 检验对正交试验结果进行差异显著分析，P＜0.05 表示差异显著，P＜0.01 表示差异极显著。

表3-3 皮肤过敏反应评分标准

平均反应值=红斑形成总分+水肿形成总分/合计动物数

表3-4 皮肤致敏性评价标准

4 试验结果

4.1 皮肤急性毒性试验

试验结果显示，在洗去药物后至药后7 天内各组皮肤未出现红斑、水肿等毒性反应，大鼠精神状态、行为活动、饮食、呼吸、眼和黏膜、粪便及分泌物均正常，大鼠无死亡，各组大鼠体重也无明显变化。各组大鼠体重变化见表4-1。

表4-1 急性毒性试验体重变化情况 g

4.2 皮肤刺激试验

4.2.1 单次刺激试验：由表4-2可见，给药后7d 内，完整皮肤组和破损皮肤组未出现红斑、 水肿和出血点等异常情况，各组大鼠皮肤健康，刺激反应评分为0，皮肤刺激强度平均分值为0，与空白组比无统计学意义。阳性药物完整皮肤组和破损皮肤组皮肤出现轻微红斑，一天后红斑消失，刺激反应评分为1。

表4-2 皮肤刺激反应评分

4.2.2 多次刺激反应大鼠背部皮肤连续给药7 天后，七子白完整皮肤组皮肤均无红斑水肿等毒性反应，且与空白组相比，皮肤比空白组的白；七子白破损皮肤组的皮肤已恢复至正常；阳性药物完整皮肤和破皮肤组大鼠皮肤严重红斑，并有结痂，表明七子白无明显刺激。详细结果见图1。

图1 七子白多次刺激试验结果

4.3 皮肤过敏反应

试验结果表明，空白组、七子白组大鼠皮肤未见局部和全身过敏反应，与空白组比没有差异，阳性药物组给药6h 洗去药物后皮肤有轻微的红斑，但无水肿，48h 后红斑消失，此外各组大鼠行为活动、精神状态等均正常，无全身过敏反应。大鼠无死亡。结果详见表4-3、

5 分析与讨论

本试验中的七子白由白芨、白芷、白术、白茯苓、白僵蚕、白芍和白蔹七种“白”姓中药组成，以上每种药物按等剂量组成[8]，从中医形象学来说，“白”姓药物一般都具有增白润色的作用，以色治色，借其色白来治皮肤暗沉等病症。现代药理研究表明： 白芷是一种抗氧化活性很强的中药，它能抑制酪氨酸酶活性和抗氧化活性[9]，其有效成分香豆素能明显抑制黑色素瘤B16 细胞中酪氨酸酶的合成[10]；在对小鼠四氯化碳（ccl4）诱导的肝脏损伤试验中，白术多糖能增加超氧化物歧化酶 （SOD） 和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，降低丙二醛（MDA）和一氧化痰（NO）含量[11]；白芨中有很高的酚类化合物，能有效地清除氧自由基，延缓衰老和促进创伤愈合等作用[12，13]；白僵蚕水提醇沉法的提取物也能清除氧自由基[14]，所以临床上常用来治疗黄褐斑等皮肤病[15]；茯苓抗氧化的研究中发现[16]，茯苓能增强皮肤中羟脯氨酸含量，从而来延缓皮肤的衰老；在大鼠皮肤烫伤中实验中，白蔹能更快更有效的伤口愈合活性，刺激肉芽组织增生[17]。从本次试验多次试验结果中可看出，七子白完整皮肤在连续给药7 次后，大鼠皮肤比空白的白嫩，且七子白破损皮肤组的皮肤也愈合，说明七子白对皮肤不仅与美白的功效，还能促进伤口的愈合，与前人报道一致。

表4-3 皮肤过敏反应评分

本试验结果显示，七子白通过对大鼠的皮肤急性毒性试验、刺激试验(单次刺激和多次刺激)和过敏试验（致敏接触和激发接触），均无毒性反应，无刺激，也未见明显过敏反应，因此认为七子白是一个安全的皮肤外用药方。