肖艳景，白慧丽，赵红梅，娄欣

(郑州大学附属郑州中心医院病理科，河南 郑州 450003)

结直肠癌在相关高危人群中的发病率明显的上升，流行病学研究证实，结直肠癌的发病率可超过252～363/10万人左右[1]。临床上结直肠癌的发生，可以导致患者生存质量的下降并增加患者的致残率[2]。

肿瘤相关蛋白的表达能够影响癌细胞的生物学特征，导致癌细胞的浸润能力或者增殖特性的改变。 错配修复（mismatch repair，MMR）蛋白的表达能够提高癌细胞的核DNA的增殖速度，导致癌细胞的扩增速度的增快[3，4]；分化抑制因子ID－2能够抑制癌细胞的分化成熟，导致癌细胞的分化成熟障碍，并能够促进低分化或者中分化的形成，导致患者细胞病理学的改变[5]；转录抑制因子BS69的表达能够稳定癌细胞的生物学特性，降低癌细胞的转录活性，降低癌细胞的持续性增殖的风险[6]。为了揭示 MMRP、BS69、Id－2 水平变化与结直肠癌患者病理特征的关系，从而为临床上结直肠癌患者的病情评估或者远期预后提供参考，本次研究收集了相关生物学指标，探讨了MMRP、BS69、Id－2水平与结直肠癌的临床病理特征的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2015年3月至2017年10月我院收治的60例结直肠癌患者作为研究对象，其中男 26 例，女 34 例，平均年龄(47.16±5.29)岁，其中高分化11例，中分化35例，低分化14例；TNM分期I期11例，Ⅱ期13例，Ⅲ期24例，Ⅳ期12例。

1.2 纳入排除标准

1.2.1 纳入标准 ①术前未接受放、化疗者；②术后病理证实为结直肠癌的患者；③患者、家属知情同意。

1.2.2 排除标准 ①合并恶性肿瘤或严重血液系统疾病的患者；②妊娠期、哺乳期妇女；③精神病患者。

1.3 观察指标及检查方法 采用免疫组化法检测MMRP、BS69、Id－2 蛋白在结直肠癌组织中的表达。将样本连续切片后，进行免疫组化检测。将切片脱蜡至水，10ml 3%过氧化氢封闭，8ml柠檬酸缓冲液进行抗原修复操作，反应5min，选用10%羊血清封闭10min，一抗，4℃温箱过夜，取出后复温30min，二抗，反应30min，磷酸盐缓冲液洗涤，脱水封片，镜检。

1.4 统计学方法 选用SPSS 18.0分析处理数据，计量资料采用均数±标准差描述，计数资料采用卡方检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MMRP、BS69、Id－2 在不同结直肠组织中表达MMRP、Id－2在结直肠癌组织中的阳性表达率（88.33% 、61.67% ） 明 显 高 于 癌 旁 正 常 组 织（61.67%、33.33%），BS69 在结直肠癌组织中的阳性表达率 （70.00%）明显低于癌旁正常组织（93.33%），差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 1。

2.2 癌组织中MMRP的表达与临床病理特征的相关性分析 癌组织中MMRP的表达与性别无相关性。MMRP在年龄≥59岁、直肠部位、TNMⅢ期和Ⅳ期、中、低分化结直肠癌患者中的表达高于59岁、左右结肠部位、TNM I期和Ⅱ期、高分化的结直肠癌患(P＜0.05)。 见表 2。

2.3 癌组织中BS69的表达与临床病理特征的相关性分析 癌组织中BS69表达在年龄、肿瘤部位、性别等方面差异无统计学意义 （P＞0.05）；BS69 在组织学分级Ⅰ、Ⅱ级、无淋巴结转移和Dukes分期A、B期患者中的表达高于组织学分级Ⅲ级、有淋巴结转移和Dukes分期C、D期的患者，差异有统计学意义（P＜0.05）。 见表 3。

2.4 癌组织中Id－2的表达与临床病理特征的相关性分析 癌组织中Id－2阳性表达在性别、年龄、病理类型等方面差异均无统计学意义 （P＞0.05)，Id－2在TNMⅢ期和Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化结直肠癌患者中的表达高于TNM I期和Ⅱ期、无淋巴结转移、高、中分化的结直肠癌患者(P＜0.05)。 见表 4。

2.5 三种蛋白在癌组织中表达的相关性 三者Spearman相关性分析显示：MMRP与BS69和Id－2蛋白表达阳性率呈正相关关系 （r=0.429和 r=0.417，P＜0.05）。 见表 5。

表1 MMRP、BS69、Id-2在不同结直肠组织中表达

表2 癌组织中MMRP的表达与临床病理特征的相关性分析

表3 癌组织中BS69的表达与临床病理特征的相关性分析

表4 癌组织中Id-2的表达与临床病理特征的相关性分析

表5 三种蛋白在癌组织中表达的相关性

3 讨论

环境因素、遗传因素等，均能够影响结直肠癌的发生，促进结直肠癌临床病理特征的进展[7]。作为消化系统常见的恶性肿瘤，结直肠癌的无瘤生存时间不足38个月，包括手术在内的相关综合性治疗措施治疗后的3年内病死率仍然超过35%[8，9]。另外一方面，现阶段临床上缺乏对于结直肠癌早期诊断的有效生物学血清分子，而本次研究通过探讨揭示了肿瘤相关蛋白表达问题的研究，可以为揭示结直肠癌的发生机制提供参考，并能够为结直肠癌的免疫靶向治疗提供基础，为结直肠癌的早期高危人群的血清学筛查提供依据。

生物学因子的浓度波动，能够在促进肿瘤细胞的早期核异型性的发生，或者中晚期临床病理特征进展过程中发挥重要的作用。其能够调控癌细胞的生物学特性，干预癌细胞的扩散和转移等，进而影响患者的整体生存预后。MMRP是重要的信号通路激活因子，其对于HIPPO信号通路的激活作用，能够提高结直肠癌上皮细胞核DNA的转录风险，导致启动子和增强子的激活，增加癌细胞的调控异常风险。同时MMRP的表达能够影响癌基因的错配修复的能力，导致错配修复能力的下降，增加了癌基因的突变风险[10]；BS69蛋白能够与结直肠癌细胞膜内的转录基因的结合，促进其甲基化的修饰，抑制癌细胞的转录过程，降低癌相关蛋白的转录及翻译的活性；Id-2能够抑制癌细胞的分化成熟，降低癌细胞的分化成熟能力，导致癌细胞的低分化的形成[11]。部分研究探讨了在结直肠癌患者病灶组织中MMRP的表达情况，认为MMRP的表达阳性率的上升是促进结直肠癌患者临床预后恶化的重要风险因素[12]，但对于ID-2或者BS69的分析研究不足。

免疫组化分析研究发现，MMRP、BS69、Id-2的表达均具有明显的差异，其中MMRP及Id-2的表达阳性率均明显的上升，高于癌旁组织，而BS60的表达阳性率明显低于癌旁组织，提示MMRP、BS69、Id-2均能够影响到恶性肿瘤的发生过程。临床病理特征的研究发现，MMRP在年龄≥59岁、直肠部位、TNMⅢ期和Ⅳ期、中、低分化结直肠癌患者中的表达阳性率明显的上升，提示了MMRP蛋白对于患者肿瘤临床分期或者癌细胞分化程度的影响，回顾国内外相关文献，笔者认为这主要考虑与下列几个方面的因素有关：⑴MMRP的上升能够降低癌细胞基因错配修复能力，导致癌基因突变后的切除修复或者重组修复能力的下降；⑵MMRP的表达上升还能够影响癌细胞的增殖速度，导致癌细胞的浸润能力的增加。马赛等[13]研究者揭示了在结肠癌患者病灶组织中的MMRP蛋白的高表达现象，认为MMRP的表达阳性率可平均上升20%以上，特别是在肿瘤进展速度较快、临床分期较晚的人群中，MMRP的表达阳性率可进一步的上升。BS69作为转录抑制因子，其表达浓度的改变能够影响到癌细胞的转录活性，导致癌细胞的转录活性的下降和增殖速度的下调，本次研究中BS69在组织学分级Ⅰ、Ⅱ级、无淋巴结转移和Dukes分期A、B期患者中的表达强度明显的上升，提示了BS69与结直肠癌患者临床病理特征的关系，这主要由于BS69能够影响到癌细胞的转录因子的活化程度，影响到转录上游增强子的调控效果，降低转录或者翻译的活性及速度。但陈尔飞等[14]研究者并不认为BS69与肿瘤患者的淋巴结转移具有一定的关系，而本次研究的相关结论与陈尔飞等存在一定差异，考虑可能与BS69蛋白的检测敏感性或者结直肠癌患者的淋巴结浸润的检出灵敏度的差异有关。最后，本次研究探讨了ID-2的表达与结直肠癌患者的临床病理特征的关系，发现Id-2在TNMⅢ期和Ⅳ期、有淋巴结转移、低分化中的表达阳性率明显的上升，这主要由于ID-2的表达能够影响到癌细胞的诱导分化成熟能力有关。相关关系分析也可见，MMRP与BS69和Id-2蛋白的表达具有密切的关系，但具体的机制不清，后续临床研究可以进一步探讨MMRP的表达与BS69等的内在关系[15]。

综上所述，结直肠癌患者中MMRP、ID-2及BS69的表达与结直肠癌患者的临床病理特征有一定相关性，且三种蛋白表达呈正相关。