李瑶 许璐 谢艳华等

[摘要] 目的 探究飛扬肠胃炎胶囊及其主要成分对常见细菌的体外抗菌作用，探寻飞扬肠胃炎胶囊的敏感菌株及主要抗菌成分。 方法 采用倍比稀释测定飞扬肠胃炎胶囊、缺药味药物、没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷的最小抑菌浓度（MIC）。 结果 飞扬肠胃炎胶囊对金黄色葡萄球菌的抑制作用最显著，MIC值为1.6 mg/mL;对福氏志贺菌和肠炎沙门菌的抑制作用显著，MIC值为3.1 mg/mL;对大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌（产肠毒素株）、伤寒沙门、鼠伤寒沙门的抑制作用较显著，MIC值为6.3 mg/mL;对肺炎克雷伯菌的抑制作用极弱，MIC值为50.0 mg/mL;对白色念珠菌几乎无抑制作用，MIC值>100.0 mg/mL;飞扬肠胃炎胶囊对临床菌包括大肠埃希菌、伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、福氏志贺菌、变形杆菌均表现出较强的抑制作用，MIC值分别为6.3、6.3、3.1、3.1、12.5 mg/mL。 结论 飞扬肠胃炎胶囊及主要成分没食子酸、鞣花酸、紫丁香苷均具有较强的抑菌作用，敏感菌株为金黄色葡萄球菌、福氏志贺菌、肠炎沙门菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌（产肠毒素株）、伤寒沙门、鼠伤寒沙门和普通变形杆菌;飞扬草、火炭母和救必应均有一定的抗菌作用，其中救必应的抗菌作用略优于其他二味中药，且救必应中发挥抗菌作用的主要成分可能为紫丁香苷。

[关键词] 飞扬肠胃炎胶囊;最小抑菌浓度;抑菌作用

[中图分类号] R285          [文献标识码] A          [文章编号] 1673-7210（2019）02（a）-0026-04

[Abstract] Objective To explore the in vitro antimicrobial activity of Feiyang Changweiyan Capsules and its main components against common bacteria， and to explore the sensitive strains and main antimicrobial components of Feiyang Changweiyan Capsules. Methods Minimum inhibitory concentration （MIC） of Feiyang Changweiyan Capsules， drug-deficient drugs， gallic acid， ellagic acid and syringin were determined by multiple dilution method. Results Feiyang Changweiyan Capsules had the most significant inhibitory effect on Staphylococcus aureus with MIC value of 1.6 mg/mL， it had significant inhibitory effect on Shigella flexneri and Salmonella enteritidis with MIC value of 3.1 mg/mL， and it had significant inhibitory effect on Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa， Escherichia coli （enterotoxin producing strain）， Salmonella typhimurium and Salmonella typhimurium with MIC value of 6.3 mg/mL. The MIC value was 50.0 mg/mL for Klebsiella pneumoniae， almost no inhibition for Candida albicans， MIC value was more than 100.0 mg/mL; Feiyang Changweiyan Capsules showed strong inhibition for clinical bacteria including Escherichia coli， Salmonella typhi， Salmonella enteritidis， Shigella flexneri and Proteus vulgaris， MIC values were 6.3， 6.3， 3.1， 3.1 and 12.5 mg/mL， respectively. Conclusion Feiyang Changweiyan Capsules and its main components， gallic acid， ellagic acid and syringin， have strong antibacterial activity. The sensitive strains are Staphylococcus aureus， Shigella flexneri， Salmonella enteritidis， Escherichia coli， Pseudomonas aeruginosa， Escherichia coli （enterotoxin-producing strains）， Salmonella typhimurium， Salmonella typhimurium and Proteus vulgaris. Euphorbia hirta L.， Polygonum chinense L. and Ilex rotunda thunb. all have certain antibacterial activity， among which the antimicrobial effect of Ilex rotunda thunb. is slightly better than that of other two traditional Chinese medicines， and the main component of the antibacterial activity of Ilex rotunda thunb may be syringin.

[Key words] Feiyang Changweiyan Capsules; Minimum inhibitory concentration; Antibacterial activity

飞扬肠胃炎胶囊（FYC）由飞扬草（Euphorbia hirta L.）、火炭母（Polygonum Chinense L.）、救必应（Ilex rotunda Thunb.）组成，具有泻火解毒，除湿止痢的功效，临床常用于急、慢性肠胃炎，细菌性痢疾的治疗[1]。飞扬草、火炭母、救必应提取物有一定的抗菌作用[2-6]。FYC对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌有良好的抑制作用[7]。为进一步寻找FYC的敏感菌株及主要抗菌成分，选择没食子酸（gallic acid，GA）、鞣花酸（ellagic acid，EA）和紫丁香苷（syringin，SY）评价FYC及其主要成分的体外抗菌作用，为FYC的二次开发研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 仪器

HPsafe-1200LC型生物安全柜（上海力申科学仪器有限公司）、HZP-250型全温振荡培养箱（上海精宏实验设备有限公司）、YXQ-LS-50S-Ⅱ立式压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限公司）、DW-86L338型立式超低温保存箱（青岛海尔特种电器有限公司）。

1.2 试药

MH营养琼脂、麦康凯琼脂培养基（广东环凯微生物有限公司，批号：2017/12/29）、LB肉汤培养基（美国Sigma公司）、飞扬肠胃炎胶囊（陕西君碧莎制药有限公司;批准文号：国药准字Z20080523）、缺飞扬草粉末（AEH）、缺火炭母粉末（APC）、缺救必应粉末（AIT）均购自陕西君碧莎制药有限公司、没食子酸（纯度99.96%，批号：PRF7091942）、鞣花酸（纯度98.8%，批号：PRF7101305）、紫丁香苷（纯度98.5%，批号：PRF1 6012001）均购自成都普瑞法有限公司、喜炎平注射液（XYP，江西青峰药业有限公司;批准文号：国药准字Z20026249）。

1.3 标准菌株

幽门螺杆菌（Hpy）ATCC43504、金黄色葡萄球菌（Sau）ATCC29213、大肠埃希菌（Eco）ATCC25922、铜绿假单孢菌（Pae）ATCC27853、大肠埃希菌（Eco）CMCC44813（产肠毒素株）、福氏志贺菌（Sfl）CMCC51285、伤寒沙门菌（Sty）CMCC50319、鼠伤寒沙门菌（Ses）CMCC50220、肠炎沙门菌（Sen）CMCC50040、变形杆菌（Pvu）CMCC49027、肺炎克雷伯菌（Kpn）CMCC46117、白色假丝酵母菌（Cal）CMCC85021，以上实验菌株由中国科学院武汉病毒研究所提供。

1.4 临床分离菌株

大肠埃希菌80株（EC001-EC80）、伤寒沙门菌30株（TY001-TY030）、肠炎沙门菌30株（ET001-ET030）、福氏志贺菌20株（SY001-SY020）、肺炎克雷伯菌50株（KE001-KE050）、变形杆菌50株（PR001-PR050），均由中国科学院武汉病毒研究所提供。

1.5 供试药液配制

AEH、APC、AIT为FYC在原方上分别去掉飞扬草、火炭母、救必应，按照FYC的制备工艺提取、制粒所得。将FYC、AEH、APC、AIT粉末用无菌生理盐水溶解为浓度200.0 mg/mL的原药液;GA、EA、SY、GA+EA、GA+SY、EA+SY、GA+EA+SY分别溶解为浓度20.0 mg/mL的原药液;XYP稀释为200.0 mg/mL的原药液。

1.6 各试药对标准菌株及临床菌株的最小抑菌浓度（MIC）测定

参照美国临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的二倍稀释法测定各试药的MIC值[8-9]。将试验菌株接种于MH肉汤，置37℃培养箱24 h，用肉汤将菌液稀释为108 CFU/mL备用。各试药以原药液进行二倍梯度稀释，依次加入96孔板中，200 μL/孔，混匀后各孔加入108 CFU/mL的试验菌液1 μL，4℃培养12 h后，转37℃培养箱培养48 h，肉眼观察结果，以无细菌生长（澄清）孔对应的最小药物浓度为该药物的MIC。

2 结果

2.1 飞扬肠胃炎胶囊及不同药味组合的抗菌作用

本研究选择12种标准菌和6种临床菌，分别测定FYC及缺少药味药物对所选菌的MIC值，結果见表1～2。FYC对标准菌中的Sau、Eco、Pae、Eco（产肠毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen、Pvu有很强的抑制作用，对Hpy和Kpn的抑制作用较弱，而对Cal无抑制作用。与FYC比较，发现AEH和APC对Sau、Eco、Pae的抑制作用降低，其MIC值均升高1～2倍;AEH和APC对Sty的抑制作用有所提高;与FYC比较，AIT对Hpy、Sau、Eco、Eco（产肠毒素株）、Sfl、Sen、Pvu、Kpn的抑制均减弱，MIC值为FYC的两倍。

FYC对所选的6种临床菌株均有一定的抑制作用，其中除对Kpn抑制作用较弱以外，对其余5种临床菌有很强的抑制作用。与FYC比较，AEH对Kpn抑制作用降低;APC对Eco抑制作用提高，而对Sen抑制作用降低;AIT对Eco、Sty、Sen、Sfl、Kpn抑制均降低。见表2。

2.2 飞扬肠胃炎胶囊及其主要成分的抗菌作用

GA、EA、SY对Sau、Eco、Pae、Eco（产肠毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen、Pvu有很强的抑制作用。GA、EA对Hpy和Kpn抑制作用较弱，与GA、EA比较，SY对Hpy和Kpn抑制作用稍强。GA和EA对Cal无抑制作用，SY对Cal有微弱的抑制作用。3个成分配伍后，GA+EA、GA+SY、EA+SY对Hpy、Kpn和Cal抑制作用增强，对其他菌抑制作用减弱，GA+EA+SY组对Sau、Eco、Eco（产肠毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen有很强的抑制作用，其抗菌作用及敏感菌株与FYC具有一致性。见表3。

GA、EA和SY对6种临床菌表现出一定的抑制作用，其中GA和EA对Eco、Sty、Sen、Sfl的抑制作用最强，对Pvu的抑制作用较强，对Kpn的抑制作用较弱;SY对Eco、Sty、Sen、Sfl、Pvu的抑制作用最强，对Kpn的抑制作用稍弱。与GA、EA、SY比较，GA+EA和EA+SY组对6株临床菌的抑制作用均减弱，GA+EA+SY组对6株菌的抑制作用与FYC的抑制作用具有一致性。见表4。

3 讨论

微生物感染是很多疾病的诱发因素，如流感、肠胃炎、痢疾、心肌炎、妇科炎症、肺炎等[10-14]。清除病原微生物是治疗许多疾病的关键。目前主要采用抗生素来治疗微生物感染相关疾病，但滥用抗生素易造成大量耐药菌出现，这对抗生素的更新迭代提出了更高要求[15-16]。许多中药提取物都具有良好的抗菌作用，且不易产生耐药作用，从中药中开发抗菌新药已成为近年来的研究热点。研究表明[17-21]，肠胃炎和细菌性痢疾的主要致病菌包括大肠埃希菌、伤寒沙门菌、肠炎沙门菌等。

体外抑菌实验方法分为试管稀释法、微量肉汤稀释法、琼脂稀释法和扩散法。前三种方法适用于测定药物对目标菌的MIC值，通过比较MIC值的大小来评价药物的抗菌作用强弱，MIC值越大，表明药物的抗菌作用越弱;扩散法包括纸片法、杯碟法和挖洞法，原理均是通过测定某一药物在确定的浓度下对目标菌的抑菌圈直径来评价其抗菌作用，通常抑菌圈直径越大，药物抑菌效果越强[22]。

采用倍比稀释法测定FYC及缺药味药物对12种标准菌和6种临床菌的MIC值，发现FYC对标准菌Sau、Eco、Pae、Eco（产肠毒素株）、Sfl、Sty、Ses、Sen和临床菌Eco、Sty、Sen、Sfl有显著的抑制作用，而对于Kpn抑制作用很弱，对Cal几乎无抑制作用;缺药味后的各药物敏感菌株与FYC表现出一致性，但对部分菌的抑菌浓度升高1～2倍，其中AIT抑菌作用减弱最显著。本研究继续测定了GA、EA、SY的抗菌作用，发现GA、EA和SY与FYC的敏感菌株具有一致性，且救必应中的SY抗菌作用优于GA和EA，这证实了FYC中救必应的抗菌作用略优于飞扬草和火炭母的猜想。3个主要成分配伍后，敏感菌株没有发生变化，各组对Hpy、Cal的抑菌作用較主要成分单独应用时均增强，但对其他菌抑制作用无显著变化，部分组对细菌的抑制作用减弱，这可能与3个药物配伍后降低了单味药物剂量有关，这也说明中药组方是在君臣佐使的理论指导下优选出的最佳配伍比例，而在进行主要成分组合时也应寻找主要成分的最佳配比关系。

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（收稿日期：2018-04-13  本文编辑：王   蕾）