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微小RNA-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用及验证两者相互作用关系

2019-03-18阮同德徐英民顾传兰许丽娜王海峰徐蒙高敏马德亮

中国实用医药 2019年4期
关键词:肌层膀胱癌组间

阮同德 徐英民 顾传兰 许丽娜 王海峰 徐蒙 高敏 马德亮

【摘要】 目的 分析微小RNA(miR)-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用, 并验证两者相互作用关系。方法 107例膀胱癌患者, 全部患者均行手术治疗, 取病理组织及瘤旁组织样本, 比较miR-34b及c-Myc在膀胱癌和瘤旁组织、肌层浸润和肌层非浸润及的各病理分级的表达水平, 采用荧光素酶法及生物信息学软件分析miR-34b与c-Myc的相互作用关系。结果 miR-34b在膀胱癌中的相对表达水平为(0.0213±0.0061), 与瘤旁组织的(0.0563±0.0089)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在膀胱癌中的相对表达水平为(0.484±0.063), 与瘤旁组织的(0.216±0.045)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.0234±0.0026), 与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.0496±0.0075)对比差异有统计学意义(P<0.05);c-Myc在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.5180±0.0826), 与62例肌层非浸润性膀胱癌中的(0.3140±0.0753)对比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-34b在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.0364±0.0047)、(0.0219±0.0034)和(0.0102±0.0028), 其表达水平随病理分级升高呈现降低趋势, 组间对比差异有统计学意义(F=386.732, P<0.05);c-Myc在低度恶性倾向、低分级、高分级病例的表达水平依次为(0.083±0.013)、(0.236±0.032)和(0.571±0.058), 其表达水平随病理分级升高呈现上升趋势, 组间对比差异有统计学意义(F=106.964, P<0.05)。经生物信息学软件检验发现, c-Myc是miR-34b的直接靶基因, 采用荧光素酶法进一步检测后证实, 共转染miR-34b的荧光强度(1.035±0.024)au明显低于共转染的c-Myc强度(3.572±0.068)au (P<0.05)。结论 c-Myc是miR-34b的直接靶基因, 二者存在密切的相关性, 可通过下调c-Myc水平提升miR-34b表达, 抑制膀胱细胞癌增殖。

【关键词】 微小RNA-34b;c-Myc;膀胱癌;作用

DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2019.04.007

临床研究证实, miR-34b在肿瘤进展中发挥着关键性作用, 在胃癌、肝癌、膀胱癌等多种恶性肿瘤组织中存在多项miRNA表达异常情况, 而膀胱癌发展与多种癌基因、抑癌基因的相互作用存在密切相关性[1-3]。目前医学界尚未就miR-34b与c-Myc的表达及作用关系达成统一共识, 为了探索二者的联系, 本文现就miR-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用及验证两者相互作用关系展开了下述研究, 以供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1. 1 一般资料 选取本院2014年3月~2018年3月收治的107例膀胱癌患者, 全部患者均行手术治疗, 取病理组织及瘤旁组织样本作为研究对象, 全部实验用品均在有效期内。

1. 2 方法 采用实时定量PCR提取样本总RNA, 根据试剂盒操作说明将其转录呈cDNA模板, 利用探针法检测器miR-34b表达, 内参U6。采用SYBR Green法测定c-Myc表达, 上游引物序列为5'-GCATCCGCACACTCGCACGAA-3';下游引物序列为5'-CGACAGTCCATCGATCGCCTAGC-3', 运用2-△△CT相对定量法对比基因表达。利用生物信息学软件进行作用于c-Myc的靶向miRNA预测, 软件包括PicTar、miRanda、TargetScan。采用荧光素酶试剂盒处理细胞组织, 利用实施荧光定量仪测定miR-34b转染状态。

1. 3 观察指标 比较miR-34b及c-Myc在膀胱癌和瘤旁组织、肌层浸润和非肌层浸润及的各病理分级的表达水平, 分析miR-34b与c-Myc的相互作用关系。所有患者中肌层浸润性患者45例, 肌层非浸润性患者62例。根据WHO 2004标准[2]将107例病理切边标本分为三组, 包括低度恶性倾向患者24例, 低分級患者48例, 高分级患者35例。

1. 4 统计学方法 采用SPSS23.0统计学软件对数据进行统计分析。计量资料以均数±标准差( x-±s)表示, 采用t检验。相关性检验采用应用Spearman等级相关分析法。P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2. 1 miR-34b及c-Myc在不同组织、肌层浸润、病理分级的表达水平对比 ①miR-34b及c-Myc在膀胱癌和瘤旁组织的表达水平:miR-34b在膀胱癌中的相对表达水平为(0.0213±0.0061), 在瘤旁组织的表达水平为(0.0563±0.0089), 组间对比差异有统计学意义(t=33.554, P=0.000<0.05);c-Myc在膀胱癌中的相对表达水平为(0.484±0.063), 在瘤旁组织的表达水平为(0.216±0.045), 组间对比差异有统计学意义(t=35.807, P=0.030<0.05)。②肌层浸润和非肌层浸润中miR-34b及c-Myc的表达水平:miR-34b在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.0234±0.0026), 在62例肌层非浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.0496±0.0075), 组间对比差异有统计学意义(t=22.451, P=0.000);c-Myc在45例肌层浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.5180±0.0826), 在62例肌层非浸润性膀胱癌中的相对表达水平为(0.3140±0.0753), 组间对比差异有统计学意义(t=13.280, P=0.000<0.05)。③不同病理分级下miR-34b及c-Myc表达水平的变化情况:miR-34b在低度恶性倾向、低分级、高分级患者中的表达水平依次为(0.0364±0.0047)、(0.0219±0.0034)和(0.0102±0.0028), 其表达水平随病理分级升高呈现降低趋势, 组间对比差异有统计学意义(F=386.732, P<0.05);c-Myc在低度恶性倾向、低分级、高分级患者中的表达水平依次为(0.083±0.013)、(0.236±0.032)和(0.571±0.058), 其表达水平随病理分级升高呈现上升趋势, 组间对比差异有统计学意义(F=106.964, P<0.05)。

2. 2 miR-34b与c-Myc的相互作用关系 经生物信息学软件检验发现, c-Myc是miR-34b的直接靶基因, 采用荧光素酶法进一步检测后证实, 共转染miR-34b的荧光强度(1.035±0.024)au明显低于共转染的c-Myc强度(3.572±0.068)au(P<0.05), miR-34b可对c-Myc产生直接作用。

3 讨论

国内外相关报道显示, miR-34b及c-Myc表达水平与肿瘤病理分级、肿瘤分类密切相关, 大量研究资料显示, 膀胱癌组织细胞中c-Myc呈现活化状态, 且随肿瘤病理分级的升高、病情的加剧呈现升高态势。本研究证实, c-Myc在膀胱癌的表达水平明显高于瘤旁组织, 差异有统计学意义(P<0.05)。经过深入探讨miR-34b及c-Myc在膀胱癌中的作用后发现, miR-34b在肌层浸润性膀胱癌中的表达水平为明显低于肌层非浸润性膀胱癌组织, 而c-Myc在肌层浸润性膀胱癌中的表达水平为明显高于肌层非浸润性膀胱癌组织, 这与既往研究一致。

整理相关文献资料后可知, c-Myc在肿瘤细胞分化、生长、增殖及凋亡过程中发挥着重要作用, 与肿瘤生物学行为存在紧密联系。本组实践证实, 膀胱癌组织细胞的miR-34b的表达水平随病理分级升高呈现降低趋势, c-Myc的表达水平随病理分级升高呈现上升趋势, 提示c-Myc与膀胱癌恶性程度关联密切。经过生物信息学软件预测、荧光素酶检验后证实, c-Myc是miR-34b的直接靶基因, 共转染miR-34b的荧光强度明显低于共转染的c-Myc强度, 表明可通过下调c-Myc水平影响癌细胞生物行为, 防控病情进展。

综上所述, c-Myc是miR-34b的直接靶基因, 通過下调c-Myc表达可促使miR-34b表达得到有效提升, 加快癌细胞凋敝, 抑制癌细胞增殖, 对膀胱癌的临床诊疗具有重要的参考价值。

参考文献

[1] 柳清, 尤泊森, 马景光, 等. MicroRNA-30a在膀胱癌中的表达及作用. 实用肿瘤学杂志, 2017(4):310-315.

[2] 郭敏, 刘佩, 郑国华, 等. p53/miR-34a通路介导羽扇豆醇的抑制人膀胱癌T24细胞增殖作用. 中国药师, 2016, 19(9):1629-1632.

[3] 万鹏飞, 黄亚琴, 王志, 等. 稳定高表达miR-449c的5637膀胱癌细胞株的建立. 细胞与分子免疫学杂志, 2016, 32(6):760-763.

[收稿日期:2018-08-14]

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