刘娜，翁闪凡，陈姝，叶国麟

(1 佛山科学技术学院，广东佛山528000；2 佛山市第一人民医院)

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，居女性癌症死亡原因的的首位[1]。侵袭和转移是导致乳腺癌预后不良的主要原因。但目前乳腺癌侵袭和转移的分子机制尚不完全清楚[2]。微小RNA(miRNA)是一类非编码小分子RNA，长度为19～25个核苷酸，主要通过结合靶基因mRNA的3′UTR区，参与基因转录后调控[3]。近年研究发现，miRNA可通过调控癌基因或抑癌基因表达，参与肿瘤细胞增殖、分化、凋亡等生物学过程[4～6]。miR-101-3p是miR-101家族的成员之一，已有研究证实，miR-101-3p表达在肺癌、卵巢癌、胃癌等肿瘤组织中明显下调，并与肿瘤的侵袭和转移有关[7～11]。Rac1是Rho家族的重要成员之一，可参与细胞有丝分裂、骨架重排等生物学过程。有研究发现，在多种肿瘤组织中Rac1高表达，且其高表达可促进肿瘤的侵袭和转移[12，13]。TargetScan软件预测，Rac1是miR-101-3p的靶向调控基因。因此，我们推测miR-101-3p可能通过靶向调控Rac1促进乳腺癌的侵袭和转移。为此，2016年7月～2018年7月，我们进行了如下研究。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 乳腺癌细胞株MCF-7、SK-BR-3、MDA-MB-435及正常乳腺细胞株HBL-100，购自上海生命科学院细胞和生物化学研究所。miR-101 mimics、miR-101抑制物及其阴性对照物，美国Ambion公司。所有引物序列由上海捷瑞生物工程有限公司设计合成。Mastercycler Ep Realplex实时荧光定量PCR仪，德国Eppendorf公司；Multiskan MK3型酶标仪，美国Thermo Fisher Scientific公司。野生型与突变型Rac1荧光素酶报告基因载体，美国Introvigen公司。PrimeScriptTMRT Reagent Kit逆转录试剂盒、SYBR Premix Ex TaqTMqRT-PCR试剂盒，日本TaKaRa株式会社；双荧光素酶活性检测试剂盒，北京艾然生物科技有限公司。Rac1、MMP-2、GAPDH一抗及HRP标记的羊抗鼠二抗，美国CST公司。……