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浅谈洗板对ELISA试验的影响

2019-02-13

兽医导刊 2019年5期

2018年11月14日,我中心实验室进行犬细粒棘球绦虫粪抗原检测试验。试验由2名实验员操作,另有3名见习实验员辅助。犬细粒棘球绦虫抗原检测试剂盒(批号:Eg-Ag20180620)由上级单位统一配发。274份犬粪样品事先经-70℃冷冻一周处理,试验当日室温解冻后每份取1 g样品,加1 ml样品处理液,4 000 rpm离心15 min待用。试验用仪器:酶标仪正常,培养箱正常,96孔自动洗板机开机冲洗管路正常。实验员甲操作A、B两块包被板184份样品的试验,实验员乙操作C块包被板90份样品的试验。试验过程严格按着试剂盒说明书逐步进行,洗板过程中习惯性的同一方向放入包被板,合上盖子洗板,未察觉异常。

试验结束,结果均成立。但三块包被板之间出现非常相似的阳性结果,即A、B、C各板的D—12、E—12、G—12三孔均显阳性(另有A板B—12孔为阳性),且C板G—12孔无样品仍显阳性。这样的结果引起我们的注意,回忆操作过程未出现遗漏、失误,检查洗板机发现D—12、E—12、G—12对应的针孔堵塞,不出液体。这样能解释为什么不同的人操作不同的反应板出现高度相似的结果,且无样品孔也出现阳性。

查出问题后,疏通洗板机针孔,随即对全部样品按原样进行复检,结果为A板B—12孔为阳性,有异议的各板D—12、E—12、G—12三孔均显阴性(其中C板G—12孔无样品)。

该试验由抗细粒棘球绦虫特异性抗体包被的微孔板和酶标记抗棘球绦虫特异性抗体,以双抗体夹心法检测犬粪便中细粒棘球绦虫抗原。试验中,加入待检样品,经过温育后,若样品中含有细粒棘球绦虫抗原,则与包被板上的抗体……

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