闫秀国

山东省东营市东营区六户镇卫生院，山东东营 257083

多成分药物代谢主要由并发代谢、序贯代谢以及多重代谢等三个部分组成，其中序贯代谢是中药多成分代谢研究的主要内容[1]。中药生物药剂学分类系统主要以多成分为整体，并且注重每个成分与其他成分之间的关系和影响，在实验中加大对成分吸收、代谢的研究[2]。川穹是传统的中药材料，对川穹的多个成分的序贯过程进行了研究，该次研究在该院于2017年8月应用了液质联用技术联合封闭肠环法对川穹的多个成分进行了研究，报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料

美国赛默飞世尔科技公司生产的Theremo液质联用系统，主要包括自动进样器，高效液相色谱仪，柱温箱，DAD检测器，质谱仪，二元泵等进行数据处理和分析；北京中兴伟业仪器有限公司生产的电热恒温水浴锅[3]；德国Sigma公司生产的1-15PK离心机；其林贝尔仪器制造公司生产的QL-901漩涡混合机；北京赛多利斯仪器有限公司生产的电子分析天平；昆山超声仪器有限公司生产的超声波清洗器；保定兰格恒流泵有限公司生产的蠕动泵。川穹的干燥根茎，对照品：成都普菲德生物技术有限公司生产的藁苯内酯、阿魏酸、洋川芎内酯I、洋川芎内酯A以及正丁基笨酞，北京百灵威有限公司生产的1-氨基苯并三唑，Fisher公司生产的甲醇，杭州娃哈哈集团有限公司生产的娃哈哈纯净水[3]。SD大鼠，体重300 g，雄性，由北京实验技术有限公司提供，将大鼠饲养于北京中医药大学动物实验室，将大鼠喂养至1周以上，大鼠自由进食和饮水。

1.2 方法

1.2.1 溶液配制 ①K-R营养液配制：取7.8 g氯化钠，0.37 g氯化钙，0.32 g磷酸二氢钠，1.4 g葡萄糖，0.35 g氯化钾，1.37 g碳酸氢钠，0.02 g氯化镁，在其中加入蒸馏水定容至1 000 mL，调节至pH 7.4[4]。②川穹水煎液制备：取出100 g川穹饮片，将其置于圆底烧瓶中，加入去离子水（总量：1 000 mL），充分浸泡1 h后，应用冷凝回流装置提取1.5 h，随后过滤。向圆底烧瓶中加入100mL去离子水，回流1h，过滤提取液[5]。将提出液合并，经水过滤后使用K-R溶液进行定容得100 mL，将定容液制成灌肠溶液，取蒸馏水+适量水提取液制成浓度为10 g/L的溶液，使用滤膜过滤，将最后得到的液体进行液质分析处理。

③对照品配制：取适量藁本内酯、阿魏酸、正丁基苯酞、洋川芎内酯I样品放置于10 h量瓶中，使用甲醇溶液稀释至浓度为10 mg/L的溶液，随后进行液质分析处理[6]。

1.2.2 实验方法 ①肠道菌代谢研究：选取10只SD大鼠，在12 h内禁食，并且自由饮水，将大鼠分为两组，其中实验组2只，供血组8只，在大鼠腹腔内麻醉药物进行麻醉处理，于实验组大鼠腹部取动脉血，将血液放置于肝素离心管中，进行保温处理，将药液注入大鼠肠腔，当药物到达肠道末端后，进行结扎处理，同时结扎静脉，收集肠道内药液。无肠道菌实验手术与有肠道菌实验方法相同，实验过程持续2 h，将收集到的血液放置于离心管中，离心10 min(4 000 r/min），在甲醇中加入上清液，过滤膜，最后进行液相分析处理[7]。

②肠壁酶代谢研究：应用无肠均实验手术，在多成分药液中加入1-氨基苯并三唑以及CYP450酶抑制剂，随后将药液注入肠道循环，1 h后在肠系膜中收集静脉血，处理方法同上[8]。

③肝代谢研究：肝代谢后药液中的多个成分进入血液系统中，肝代谢实验应用了封闭肠环法，将川芎药液封闭于结肠内，不需要结扎静脉和供血，在1 h后取10 mL静脉血，样品处理同上[9]。

2 结果

在前期实验中，结果已经证实了川穹的多个成分稳定存在于人工肠液和胃液中，因此应用液质联用技术能够研究川穹多个成分在肠道菌群、肠壁、肝脏等部位的序贯的代谢、吸收情况，见表一。

表1 血浆样品中川穹成分的存在情况

3 讨论

中药学中药剂的分类较为广泛，且中药中有较多成分，并且每种成分均会受到其他成分的影响，因此在中药代谢发展中应该逐渐加大对代谢、吸收的研究，将生物药剂学的分类系统作为肠渗透的主要指标。中药在人体中吸收之前，需要先进行消化酶、消化液、肠道细菌酶、自由基反应，随后进行生物转化，中药在经过胃肠道膜时，也有可能被上皮细胞中的药物代谢酶进行转化，在中药生物药剂分类中哪些因素因素是引起肠渗透反应的重要机制，需要进行重点研究，该次研究中采用多成分药物代谢序贯法进行研究，主要阐述了重要生物药剂分类系统中的肠渗透评价。多成分药物面对多个靶点产生作用后，多成分药物开始发挥其药效，这些药物成分在达到相应的靶点，完成代谢过程后，即开始产生疗效，因此临床上已经将多成分药物的代谢过程作为一个研究重点。目前临床上对单一药物成分代谢的研究已经较为成熟，也取得了一定的成果，但是临床上针对两种成分以上的代谢作用的研究较为少见，且该次研究主要坚持多种成分药物测定研究的原则，按照口服药物的消化过程，从而开展多成分药物代谢的主要途径。消化酶代谢以及消化液代谢是分别在人工肠液以及人工胃液的酸碱性环境下，观察多成分药物是否发生转化和代谢。在肠道菌群的代谢情况下，需要对比肠道壁细胞代谢情况下的多成分药物代谢情况，在肝代谢作用下，研究需要对比腹主动脉血以及肝门静脉血的成分差异，从而合理阐述肝代谢情况，在上述肝代谢、肠壁代谢、肠道菌群代谢以及消化酶、液代谢的四个过程中，应该在时间、空间上保持连续性，因此将此种研究命名为“序贯代谢”。

在多种成分药物代谢中，主要由并发代谢、序贯代谢以及多重代谢组成，川穹是一种传统的中药，在应用高效液相色谱法对川穹的多个成分进行研究中，川穹多成分的代谢转化种类较少，而原型吸收种类较多。在本研究基础上还应用了液质技术，将定性成分进行分类，主要阐述了各种代谢的序贯过程，并且选出了以吸收为主的成分作为中药生物药剂中评价肠渗透的主要成分。

通过实验可知，3-羟基丁基苯肽、洋川芎内酯G、洋川芎内酯F、洋川芎内酯I、洋川芎内酯J、阿魏酸等成分能够由血液吸收，并在序贯代谢的各个阶段停止代谢，因此可在中药生物药剂系统合理的评价肠渗透性质[10]。洋川芎内酯Q、洋川芎内酯A、新蛇床内酯、Z-藁本内酯、E-藁本内酯、正丁基笨酞等成分不存在于肝门静脉中，因此不能够作为评价肠渗透性质[11]。洋川芎内酯H可以以原型吸收，并在肝部位发生代谢，因此可评价肠渗透性质，此成分在吸收原型化合物以及肝代谢转化中较为复杂，只能够作为评价肠渗透的次选方案[12]。洋川芎内酯M能够在肠道菌群中发生代谢反应，此成分吸收情况较为混乱，难以找到有效的实验方法，因此不适合作为中药生物药剂分类中评估肠渗透性质的主要成分[13]。

通过研究川芎多个成分的序贯代谢过程，能够系统性、完整性的评估多个成分的代谢、吸收情况，多成分代谢、吸收在临床上是中药用药的关键。随着近些年来肠道代谢受到了越来越多人的关注，多成分药物在肠道、肝部吸收代谢也显得越来越重要。因此在研究过程中，应该坚持实验原则，并且注重过程的连续性和整体性，让实验结果更具科学性。