李明

(河北省沧州市食品药品检验所，沧州 061000 )

水辣蓼为蓼科植物水辣蓼(PolygonumhydropiperLinn)的全草，味辛，性温，有祛风散瘀、祛湿止痛、消肿解毒等功效。可用于痢疾、肠胃炎、腹泻、脚气、疥癣、风湿关节痛、跌打肿痛等； 外用治毒蛇咬伤、皮肤湿疹等[1]。研究发现，水辣蓼全草主要含黄酮类、挥发油类、鞣质类等[2]，其中黄酮类成分主要为黄酮苷及苷元类，具有抗氧化、抗菌等活性[3-5]。在医药、食品、植物源农药等方面有着良好的开发前景。芦丁、槲皮素作为对照品控制水辣蓼的质量[6-8]，在《中华本草》中是以槲皮素作为水辣蓼的薄层对照成分。水辣蓼并无特定道地产区，全国大部分地区均可种植。笔者以芦丁和槲皮素的含量为指标对16批药材进行质量检测，并进行聚类分析，可为水辣蓼的产区选择提供参考。

1 仪器与试药

1.1仪器 日本岛津高效液相色谱仪(LC-20AD泵，SIL-20A自动进样器，SPD-M20A检测器)；KQ5200DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；分析天平(赛多利斯仪器系统有限公司，型号：BSZZ4S，感量：0.001 mg)。

1.2试药 16批不同产地来源的水辣蓼药材(表1)；芦丁、槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院)；乙腈(Sigma公司，色谱纯)；纯净水(娃哈哈集团有限公司)；甲醇、乙醇、乙酸为分析纯。

2 方法与结果

2.1溶液的配制

2.1.1对照品溶液的配制 精密称取芦丁和槲皮素对照品10 mg，用甲醇溶解于10 mL量瓶中，配制成1 mg·mL-1溶液。

2.1.2供试品溶液的制备 取干燥水辣蓼药材粉碎，粉末过孔径250 μm(四号)筛，精密称1.0 g，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇50 mL，45 ℃超声提取30 min，冷却至室温后，60%乙醇补足重量。滤过，将续滤液水浴蒸干，甲醇溶解至5 mL量瓶中，过孔径0.45 μm微孔滤膜，续滤液进入高效液相色谱中检测。

表116批水辣蓼产地

Tab.1Originof16batchesofPolygonumhydropiperLinn

编号产地1广东茂林2广东广州3广西玉林4广西南宁5贵州湄潭县6贵州六盘水盘县7贵州黔东南荔波县8贵州安顺编号产地9吉林白城10吉林通化11辽宁锦州12辽宁大连13河北白洋淀14河北邯郸15陕西商洛16陕西汉中

2.2色谱条件 Hypersil ODS2 C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流速 1.0 mL·min-1；柱温：25 ℃； 检测波长：360 nm ；进样量：10 μL，流动相：乙腈-0.1%乙酸溶液(20：80)等度洗脱。分离色谱见图1。芦丁在约8 min出峰，槲皮素在约17 min出峰。

1.芦丁；2.槲皮素

图1芦丁、槲皮素对照品(A)和水辣蓼药材(B)HPLC色谱图

1.rutin；2.quercitin

Fig.1HPLCchromatogramsofrutinandquercitinreference(A)andPolygonumhydropiperLinn(B)

2.3方法学考察

2.3.1线性关系考察 精密称取适量芦丁、槲皮素对照品储备液配制成芦丁浓度5.213，10.23，20.56，50.12，100.5，200.2 μg·mL-1，槲皮素浓度5.182，10.16，20.33，50.82，101.6，203.2 μg·mL-1标准混合对照液。以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得到回归方程分别为Y=26 802X+20 123，r=0.999 5；Y=30 256X+12 456，r=0.997。结果表明芦丁、槲皮素分别在5.213～200.2 μg·mL-1和5.182～203.2 μg·mL-1两个范围内线性良好。

2.3.2重复性实验 精密称取同一批药材粉末6份(编号1)，按照供试品溶液制备方法制备，HPLC测定得到6份芦丁、槲皮素的含量，RSD分别为0.213%和0.356%，均小于3%，符合要求。

2.3.3精密度实验 取同一对照品溶液(芦丁50.12 μg·mL-1，槲皮素50.82 μg·mL-1)按照上述色谱条件连续进样5次，芦丁和槲皮素日间精密分别为1.211%和1.233%，日内精密度分别为0.155%和0.215%。

2.3.4稳定性实验 取同一份对照品溶液(芦丁50.12 μg·mL-1，槲皮素50.82 μg·mL-1)，按照上述色谱条件分别于0，4，8，12，24，48 h进样，RSD分别为0.233%和0.456%，表明样品在48 h内稳定。

2.3.5回收率实验 精取同一已知含量的水辣蓼分别置9个三角瓶中，每3份一组，按样品中芦丁和槲皮素含量的 120%，100%，80% 分别加入适量芦丁和槲皮素对照品溶液，然后按“2.1.2”项方法制备，测定，芦丁和槲皮素对照品平均加样回收率分别为99.78%和97.281%，RSD分别为0.123%1.451%，加样回收率合格。

2.4聚类分析 本实验采用离差平方和方法对数据进行聚类分析。此法效仿方差分析的基本思想，即合理的分类使得类内离差平方和较小，而类间离差平方和较大[9]。数据统计分析软件为SAS 9.0版。

按照“2.2”项方法对16批药材中芦丁、槲皮素含量进行测定，对比见表2。16个产地来源药材芦丁含量为0.6578～0.9975 mg·g-1，槲皮素含量为0.4987～0.686 mg·g-1。芦丁含量最高的药材来自1号(广东茂林)，为(0.9975±0.0280) mg·g-1；槲皮素含量最高的药材来自3号(广西玉林)，为(0.7816±0.0112) mg·g-1。

将上述结果经过聚类分析可分为两类：1～9号一类，10～16号为一类，基本可以分为南水辣蓼(芦丁平均含量为0.818 7 mg·g-1，槲皮素平均含量为0.585 7 mg·g-1)和北水辣蓼(芦丁平均含量0.715 4 mg·g-1，槲皮素平均含量为0.554 9 mg·g-1)，两类对比，南水辣蓼两种成分含量均比北水辣蓼高。见图2。

表216批药材来源及成分含量

Tab.2Originandcomponentcontentof16batchesofPolygonumhydropiperLinn

产地编号芦丁槲皮素10.997 5±0.028 00.678 5±0.013 120.876 4±0.020 00.597 4±0.000 930.954 2±0.045 00.781 6±0.011 240.876 3±0.059 00.527 8±0.006 150.762 4±0.032 00.521 3±0.009 960.685 3±0.032 00.498 7±0.008 770.876 2±0.040 00.612 3±0.012 080.657 8±0.037 00.541 2±0.004 090.682 3±0.051 00.512 3±0.026 0100.647 2±0.004 00.459 1±0.031 0110.715 6±0.016 00.612 3±0.015 0120.714 3±0.004 00.458 9±0.013 0130.756 8±0.049 00.513 8±0.003 0140.749 5±0.040 00.612 3±0.014 0150.697 8±0.037 00.542 1±0.006 0160.726 8±0.017 00.685 6±0.009 0

图2 16批水辣蓼聚类分析

Fig.2Clusteringanalysison16batchesofPolygonumhydropiperLinn

3 讨论

中药材辣蓼通常指蓼科植物水辣蓼或旱辣蓼的干燥全草，产于我国南北各地，多生于溪边、山坡、湿地[10]。本实验研究了解不同产地水辣蓼中两种黄酮成分含量差异，当聚类分析分成两类时，按地区分为南北两大类，南水辣蓼含量更高。其中9号产地为吉林白城湿地附近，含量较北水辣蓼高，可被分到第一类中。当聚类分析分为四类时，即1～4号产地、5～9号产地、10～12号产地、13～16号产地，产地明确被分为我国东南、西南、东北、中部地区，其中西南贵州地区水辣蓼芦丁、槲皮素含量最高。提示湿度高的地区水辣蓼质量更高，为水辣蓼的种植和质量提升提供理论依据。