王晶，袁玉华

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是以慢性滑膜炎、进行性骨质破坏、关节功能丧失为特征的自身免疫病。因其高致残率、脏器受累而严重威胁人类健康，影响约1%～3%的世界人口［1］。微小RNA（microRNA，miRNA）是一类高度保守的、非编码的、通过引起靶mRNA降解、翻译抑制、脱腺苷酸化实现转录后调控的小分子RNA，在自身免疫、自身炎症疾病中起着重要调节作用［2-3］。区别于其他免疫调节因素有或无的特点，miRNA 主要在数量、程度上影响靶基因水平，只需要几个碱基互补便可在免疫应答各水平执行较柔和、精细的调节。约90%的蛋白编码基因受miRNA 的调控［2］，miRNAs 在RA 的发生、发展中也起了重要的调节作用。例如，miR-155通过靶定细胞因子信号1（cytokine signaling 1，SOCS1）调节干扰素γ（interferon-γ，IFN-γ）、白细胞介素（interleukin，IL）-4、IL-12 等细胞因子参与RA炎症反应［4］；RA 患者外周血、滑膜组织、滑液中miR-146a水平升高，也参与了RA的促炎过程；而且外周血miR-146a的水平与红细胞沉降率呈正相关，与RA 活动度有关［5-6］。越来越多的研究发现，核因子κB（nuclear factor-kappa B，NF-κB）信号通路在RA 的发生、发展中也起了重要作用。本文就RA 中近年来研究发现的与NF-κB 信号途径相关的miRNA及其作用机制作一综述。

1 NF-κB信号通路简介

NF-κB是一种能与免疫球蛋白kappa轻链基因的增强子B 序列特异性结合、促进κ 轻链基因表达的转录因子［7］，包括Rel（cRel）、p65（RelA，NF-κB3）、RelB、p50（NF-κB1）和p52（NF-κB2）5个亚单位，以两两结合形成同源或异源二聚体的形式发挥作用。通常情况下，NF-κB与其抑制蛋白IκB（包括IκBα、IκBβ 和IκBε）结合，并不表现出转录活性。IκB 激酶复合体（IκB kinase，IKK）是调控NF-κB 信号通路的核心环节，由IKKα、IKKβ 和IKKγ 组成。NF-κB主要是通过两条途径激活。在经典激活路径中，上游信号引起IKK蛋白激酶复合体的激活，促进IκB 的磷酸化，导致IκB 被蛋白酶体降解，NF-κB 失去IκB 的抑制作用而进入细胞核，参与相关基因转录。此途径通常由微生物、病毒感染、促炎细胞因子等细胞外信号刺激后发生。在替代（非经典）激活路径中，前体p100 在NF-κB 诱导激酶和IκBα 的作用下被降解为具有活性的p52，且与RelB 组成异源二聚体而进入细胞核，调控基因的转录。目前大量研究表明经典和/或非经典NF-κB信号通路在RA中起着重要作用［8-10］。

2 RA中NF-κB信号通路相关的miRNA及其作用机制

作为一个功能广泛的转录因子，NF-κB 成为大量miRNA 的靶定目标。NF-κB 的表达和活动可以直接或间接地被各种miRNA上调或下调，且可以调控多种miRNA的表达，因此异常的NF-κB活性常与异常的miRNA水平相关。

2.1 miR-146 miR-146是天然和获得性免疫分化及细胞生物学功能的重要调节因子，在多种疾病和癌症中发挥重要作用。Liu 等［11］发现，在加入miR-146a 模拟物或Toll 样受体4（Toll-like receptor 4，TLR4）/NF-κB 途径抑制剂后，类风湿关节炎成纤维细胞样滑膜细胞（fibroblast-like synoviocytes，FLSs）的细胞增殖降低、凋亡增加，加入miR-146a 抑制剂则相反；加入miR-146a 模拟物或TLR4/NF-κB 途径抑制剂后，TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17、环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、基质金属蛋白酶（matrix metalloproteinase，MMP）-3、诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）、一氧化氮（nitric oxide，NO）的表达水平降低，加入miR-146a 抑制剂或TLR4 后，上述因子表达水平升高；同时在鼠RA 模型FLSs 中，加入miR-146a 模拟物后，发现TLR4和NF-κB水平降低，关节炎评分低于对照组，证实了miR-146a 通过抑制TLR4/NF-κB通路，抑制了RA FLSs的增殖和炎症反应［11］。

2.2 miR-125b Zhang等［12］的一项研究提示，在RA患者血浆、滑膜组织以及脂多糖刺激后的FLSs 中miR-125b 水平明显升高，miR-125b 过表达明显增加肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、IL-6、IL-1β、磷酸化p65（p-p65）的表达水平，明显降低NF-κB抑制蛋白IκB-α水平；miR-125b下调则结果相反；同时，该研究发现miR-125b水平与TNF-α、IL-6、IL-1β水平呈强正相关；NF-κB抑制剂显著降低抗炎细胞因子水平，共转染pcDNA-IκB-α后抗炎细胞因子水平进一步降低，证实了miR-125b升高通过激活NF-κB途径促进RA的炎症发生。

2.3 miR-21 miR-21 在RA 患者中高表达。Chen等［13］研究显示，与对照组相比，鼠RA 模型FLSs 中miR-21 和NF-κB 水平增加，且miR-21 水平下调导致NF-κB水平和细胞增殖率显著下降；在正常的成纤维细胞样滑膜细胞中，miR-21过表达导致NF-κB水平和细胞增殖率显著增加，miR-21过度表达的影响可被BAY 11-7082（NF-κB 核转位抑制剂）逆转，阐明了在鼠RA 模型中，上调的miR-21 通过促进NF-κB 核位移影响NF-κB 途径，从而促进细胞增殖。

2.4 miR-18a miR-17-92 簇编码6 种不同的miRNAs，即miR-17、-18a、-19a、-19b、-20a和-92a，是包括自身免疫系统疾病等多种疾病发病机制的关键调节者。Trenkmann等［14］研究发现，以miR-17-92的前体分子或pre-miR-18a转染RA FLSs后，基质降解酶、促炎细胞因子和趋化因子的表达水平显著提高；TNF-α能以NF-κB依赖的方式诱导miR-17-92初级转录本（C13orf25）以及miR-18a、-19a、-20a和-92a等成熟体表达，在8 h和16 h明显升高，这种诱导依赖于C13orf25 启动子中的一个NF-κB 结合位点。NF-κB 途径抑制剂——TNF-α 诱导蛋白3（TNF-α-induced protein 3，TNFAIP3）是miR-18a 的靶基因。在RA FLSs 中，miR-17-92 簇是由TNF-α通过NF-κB 途径诱导及抑制TNFAIP3，构成了NF-κB 信号的正反馈回路，因此，miR-17-92 簇衍生的miR-18a通过增加炎症细胞因子和基质降解酶的生成，加重了RA炎症反应和关节损伤。

2.5 miR-138 Zhang 等［15］研究表明，长链非编码RNA HOTAIR 与miR-138 的表达呈负相关，而在脂多糖诱导的软骨细胞中miR-138 的表达显著增加。HOTAIR过度表达对增殖和炎症的影响可被过表达的miR-138 部分逆转。此外，HOTAIR 过表达通过抑制p65 对细胞核的作用，显著抑制脂多糖对软骨细胞中NF-κB 的激活，导致IL-1β 和TNF-α 下调。证实了HOTAIR通过增加细胞增殖率和抑制炎症在RA 中起保护作用，可能与miR-138 表达和NF-κB信号通路的调节有关。

2.6 miR-10a RA 的主要病因是炎症细胞因子的过度表达和NF-κB 激活介导的持续组织损伤。Mu等［16］研究表明，与骨关节炎相比，RA 中miR-10a 下调，这种下调可以由TNF-α 和IL-1β 以一种NF-κB依赖的方式通过促进转录因子YY1（YingYang1）的表达触发，miR-10a 表达下调能够加速IκB 降解，并通过靶定白细胞介素- 1 受体相关激酶4（interleukin-1 receptor-associated kinase 4，IRAK4）、TGF-β 激活激酶1（TGF-beta-activated kinase 1，TAK1）、β 转导重复蛋白1（β-transducing repeatcontaining protein 1，BTRC）使NF-κB 激活；且miR-10a 介导NF-κB 激活，显著促进了包括TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemoattractant protein 1，MCP-1）、MMP-1、MMP-13等炎症细胞因子的产生，加入miR-10a 抑制剂可加速成纤维细胞样滑膜细胞的扩散和迁移。该研究表明，存在一种新型的NF-κB/YY1/miR-10a/NF-κB调控通路，促进NF-κB介导的炎症细胞因子的过度分泌以及RA FLSs 的增殖和迁移，提示miR-10a 可以作为控制这一调节通路的开关，可望成为RA 诊断、治疗的靶点。

2.7 miR-410-3p 在RA FLSs 中，miR-410-3p 通过调节NF-κB 信号通路抑制细胞因子释放。Wang等［17］研究发现，miR-410-3p 在滑膜组织、FLSs 中的表达水平降低，过表达miR-410-3p可显著地降低人FLSs中TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-9的分泌；而抑制miR-410-3p 则提高了这些细胞因子的表达水平。此外，降低miR-410-3p 表达可激活NF-κB 信号通路，过表达miR-410-3p 则抑制NF-κB 信号通路的激活，且抑制NF-κB信号通路能逆转抑制miR-410-3p表达引起的TNF-α、IL-1β、IL-6、MMP-9升高，从而证实了miR-410-3p 通过调节NF-κB 信号通路，在RA的发病机制中起炎症抑制剂的作用。

2.8 miR-548 目前研究表明，外泌体里包裹的miRNA 也在RA 中扮演着关键的角色。Wang 等［18］研究发现，外泌体包裹的miR-548a-3p在RA患者血浆外泌体和外周血单核细胞中显著减少，RA患者血浆外泌体中miR-548a-3p 与C 反应蛋白（C reactive protein，CRP）、类风湿因子（rheumatoid factor，RF）、红细胞沉降率（erythrocyte sedimentation rate，ESR）水平呈负相关，miR-548a-3p通过调节TLR4/NF-κB信号通路，可以抑制单核巨噬细胞pTHP-1 细胞增殖和激活，外泌体中miR-548a-3p可预测RA疾病活动度，miR-548a-3p/TLR4/NF-κB轴可成为RA诊断和治疗的靶点。还有研究表明，间充质干细胞移植可以通过减弱miR-548e 对IκB（NF-κB 抑制蛋白）的抑制作用而部分减轻RA 症状。Yan 等［19］研究发现，在胶原诱导的RA 小鼠中，间充质干细胞移植通过激活TGF-β 受体信号，降低NF-κB 信号的活性，从而降低关节组织中miR-548e的水平；生物信息学分析表明，miR-548e 通过与IκB 的3′非翻译区结合，抑制IκB 的蛋白质翻译；间充质干细胞与携带miR-548e的腺病毒联合移植，解除了间充质干细胞对胶原诱导的RA 小鼠的治疗作用；此外，在胶原诱导的RA 小鼠模型中，携带miR-548e 反义序列的腺病毒移植具有间充质干细胞移植的部分治疗作用。

2.9 miR-223、miR-16 和miR-15a 巨噬细胞是参与调节炎症反应的一种主要细胞，其功能失调也会导致自身免疫病、癌症等疾病的发生。Li 等［20］研究发现，在单核细胞向巨噬细胞分化的过程中，IKKα表达逐渐增高，IKKα 的表达增高由miR-223、miR-16 和miR-15a 表达降低引起，IKKα 正是这3 个miRNA 的直接作用靶点；IKKα 表达增高，将促进p52的生成（过量p100被加工成p52），因p52之间形成的同源二聚体不具有转录活性，因此p52 的增高并没有引起非经典型NF-κB通路的活化；但当细胞接受LPS刺激时，RelB表达增多，p52与RelB形成有活性的转录因子，促进了NF-κB 非经典途径的活化，启动了相关基因（比如炎症介质）的转录。

3 总结与展望

RA 是一种全身免疫性疾病，发病机制复杂，目前研究认为免疫、炎症相关基因的调控在其中起着重要作用，而这些基因调控并非单独起作用，联合分析调控因素能够更好地预测疾病风险和治疗效果。NF-κB 和miRNA 是RA 疾病发生、发展中的重要调控因子，两者可被多种因素激活，不同miRNA 之间存在协同或对抗作用，NF-κB与miRNA编码基因存在多态性等原因使得调控网络错综复杂，机制尚未完全阐明。但随着对NF-κB 和miRNA 这两个关键调控因子及调节通路研究的深入，必将有助于阐明RA的发病机制，从而找到RA治疗的有效途径。