孔 瑕，黄 晴，李 慧，陈章宝

（西南大学药学院中医药学院，重庆 400715）

黄精，是百合科植物滇黄精Polygonatumkingianum Coll.et Hemsl.、黄精 Polygonatumsibiricum Red.或多花黄精Polygonatumcyrtonema Hua的干燥根茎。依外形上的差别，习称“大黄精”、“鸡头黄精”、“姜形黄精”。黄精具有悠久的临床药用历史，现代药理试验证明其具备提高免疫力、降低血糖、降低血脂、抗肿瘤、抗菌抗病毒等作用。

选用重庆产黄精为原料，以提取液中多糖的含量为指标，考查黄精多糖提取方法、提取液澄清剂和口服液处方组成等因素，筛选得到黄精多糖口服液最佳制备工艺，为黄精的进一步开发和利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

黄精药材，采自重庆酉阳黄精种植基地。

无水葡萄糖对照品，上海源叶生物科技有限公司提供；无水乙醇、浓硫酸、苯酚、碳酸氢钠、聚乙烯基吡咯烷酮（PVP-K30），成都市科龙化工试剂厂提供；Ⅲ型ZTC1+1天然澄清剂，天津振天成科技有限公司提供。

1.2 仪器与设备

SHZ-D（III） 型集热式恒温加热磁力搅拌机、DF-101S型循环水式真空泵，巩义市予华仪器有限责任公司产品；RE-2000A型旋转蒸发仪，上海亚荣生化仪器厂产品；DHG-9140A型电热恒温鼓风干燥箱，上海齐欣科学仪器有限公司产品；精密天平，北京赛多利斯仪器系统有限公司产品；GI系列灭菌锅，厦门致微仪器有限公司产品；超声波细胞仪，宁波新芝生物科技股份有限公司产品；TG16-WS型台式高速离心机，湘仪离心机仪器有限公司产品；冷冻干燥机，北京博医康实验仪器有限公司产品。

1.3 黄精多糖的含量测定[1]

1.3.1 对照品溶液的制备

1.3.2 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.1，0.3，0.5，0.6，0.7，0.8，1.0 mL，分别置10 mL具塞刻度试管中，加水至2.0 mL，摇匀后精密加入6%苯酚1.0 mL，摇匀后精密加入浓硫酸5.0 mL（总体积8mL），冷却至室温后，沸水浴显色15 min，以2.0 mL水按同样显色操作为空白。紫外-可见分光光度法，于波长490 nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、多糖质量浓度（μg/mL） 为横坐标，标准曲线方程为Y=0.045 1X+0.032 6，R2=0.999 9。

苯酚-硫酸法标准曲线见图1。

图1 苯酚-硫酸法标准曲线

1.3.3 精密度试验

取同一标准品溶液按“1.3.2”项下方法显色，测吸光度，连续测定6次，RSD=0.274%（n=6），表明仪器精密度良好。

1.3.4 加样回收率试验

精密量取质量浓度为1.0 mg/mL的黄精多糖供试品溶液10 mL，加入100 mL容量瓶中定容，得质量浓度为0.1 mg/mL的黄精多糖溶液。精密量取上述溶液1 mL，平行5份，分别加入0.02，0.04，0.06，0.08，0.1 mg/mL的葡萄糖标准品溶液1 mL，苯酚-硫酸法显色，测定回收率。加样回收率平均值为98.6%，RSD=1.15%（n=5），说明该试验方法可行。

1.3.5 稳定性试验

蟋蟀在堂，岁聿其莫。 今我不乐，日月其除。 无已太康，职思其居。 好乐无荒，良士瞿瞿。 (莫，暮。 职，应该。)

精密量取同一黄精多糖供试品溶液2 mL，苯酚-硫酸法显色后分别在0，10，20，30，40，50，60 min测定吸光度，结果测得RSD=1.36%（n=7），表明供试品溶液显色后在60 min稳定（测定过程需在60 min内完成）。

1.4 黄精多糖提取工艺的研究

1.4.1 黄精多糖回流提取方法

取黄精粉末100 g，加水（料液比1∶10），水浴80℃，回流提取1 h，取出滤液，滤渣加水，继续提取1 h。合并滤液，浓缩至一定浓度。

取200 g黄精，洗净后加入2 000 mL水，水浴80℃，回流提取1 h，取出滤液，滤渣加入2 000 mL水，煮沸1 h，将两部分滤液合并，浓缩体积至1 000 mL。

1.4.2 黄精多糖超声提取方法

取200 g黄精，洗净后加入2 000 mL水，60℃超声提取1 h，取出滤液，滤渣加入2 000 mL水，继续提取1 h。合并滤液，浓缩体积至1 000 mL。

1.4.3 黄精多糖煎煮提取方法

取200 g黄精，洗净后加入2 000 mL水，煎煮1 h，取出滤液，滤渣加入2 000 mL水，继续煎煮1 h。合并滤液，浓缩体积至1 000 mL[2-3]。

1.5 ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清剂最佳工艺的研究

ZTC1+1天然澄清剂主要去除鞣质、蛋白质、树脂等胶体不稳定成分，对中药有效成分如多糖、黄酮、生物碱、皂苷类矿物质等不影响[4]。

1.6 黄精多糖口服液的处方筛选

正交试验在处方预试验选择的基础上，以防腐剂（A）、稳定剂（B）、pH值（C） 为因素，以多糖含量和澄明度为指标，用正交试验优化口服液辅料。每个因素设立3个水平。

正交因素与水平设计见表1[5-6]。

表1 正交因素与水平设计

1.7 工艺验证

按照以上筛选得到的口服液制备工艺制备多糖口服液，检测口服液多糖含量、澄明度等指标。

2 结果与分析

2.1 黄精多糖提取工艺的研究

黄精多糖分别用回流提取、超声提取和煎煮法提取的黄精多糖含量分别为58.4%，57.9%，59.6%，3种提取方法提取的糖含量相差不大，黄精用直接煎煮法提取的黄精多糖含量最高，且操作最简便，因此选择煎煮法提取黄精多糖。

2.2 ZTC 1+1和壳聚糖2种澄清剂的比较试验结果

2种澄清剂对黄精提取液进行澄清的试验结果见表2。

表2 2种澄清剂对黄精提取液进行澄清的试验结果

相比壳聚糖澄清剂，使用Ⅲ型ZTC 1+1天然澄清剂后黄精多糖保留率更高，而且能够更好地除去黄精水提物中的杂质。故以Ⅲ型ZTC 1+1天然澄清剂作为澄清剂澄清黄精多糖水提取液。

2.3 黄精多糖口服液的辅料筛选

以澄明度、总多糖含量为指标，根据上表进行试验。

试验结果见表3，方差分析见表4。

表3 试验结果

表4 方差分析

比较3个因素的极差可得，各因素口服液澄明度影响程度依次为稳定剂＞防腐剂＞pH值，稳定剂对口服液澄明度及多糖含量的影响较大，为了提高口服液澄明度，由表3得最佳工艺为A2B3C1，综合单因素考查结果确定最佳辅料组合为防腐剂羟苯乙酯0.04%，稳定剂PVP-K30 0.2%，pH值5.0。

2.4 工艺验证

按照以上筛选得到的黄精多糖口服液制备工艺重复制备3批产品，直观观察产品为棕红色液体且无沉淀生成，按黄精多糖含量测定方法测定功效成分多糖质量浓度为1.28±0.05 g/10 mL，均符合产品质量标准，且重现性良好。

3 结论

黄精主要成分是多糖，多糖耐热且水溶性好，因此用直接煎煮法可以将黄精中多糖提取出来,能满足口服液制备要求，同时用水提取黄精中多糖，黄精中的其他水溶性成分（如生物碱、甙、鞣质、水溶性有机酸）也会被提取出来，这些成分容易形成沉淀，影响口服液的稳定性，因此黄精多糖提取液采用ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清剂进行絮凝沉淀，提高口服液的稳定性，ZTC 1+1Ⅲ型天然澄清剂的最佳工艺为B/A组分浓度1%/1%，药液浓度1∶5，温度70℃，B/A组分用量体积比5。为提高口服液的稳定性，对口服液的处方进行筛选，得到黄精多糖口服液的最佳处方为黄精多糖提取浓缩液约350 mL，稳定剂0.2%，pH值5.0，羟苯乙酯0.04%，纯化水定容至400 mL，制备的多糖口服液澄清、多糖含量符合口服液质量标准。