王林林， 姜亚玲， 刘秋伟

(郑州工业应用技术学院 药学院， 河南 郑州 451100)

0 引 言

单硝酸异山梨酯属于硝酸酯类抗心绞痛药，为硝酸异山梨酯的活性代谢产物，是新一代长效抗心绞痛药物，药理作用与机制和硝酸甘油十分类似[1]，主要通过扩张外周静脉、动脉和冠状动脉发挥作用。本品水溶性增大，不易透过血脑屏障，故与脂溶性大的硝酸异山梨酯比较中枢神经系统不良反应较轻，但本品起效较慢，不宜用于心绞痛急性发作，适用于冠心病的长期治疗和预防心绞痛发作[2-3]。单硝酸异山梨酯缓释片采用特别工艺，达到一天一次用药即可有效控制心绞痛疾病发作的效果，极大改善病人对药物的顺应性。缓释片使长期用药变得十分方便，对医生和患者都很有帮助。本研究是为了给仿制药单硝酸异山梨酯缓释片建立一种科学、合理的含量检测方法，要求证明采用的方法适合于相应的检测需求，准确度、重复性、精密度、专属性、线性和范围以及溶液稳定性都达到2010版药典的相关要求[4-5]。

1 实验部分

1.1 仪器和试剂

实验所用仪器和试剂分别见表1和表2。

表1 仪器

1.2 含量检查

1.2.1 溶液的制备

1.2.1.1 供试品溶液

取本品适量，研细，加流动相溶解并稀释制成每1 mL中约含单硝酸异山梨酯5 μg的溶液，作为供试品溶液；取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于单硝酸异山梨酯25 mg)，置250 mL量瓶中，加流动相适量，振摇20 min，使单硝酸异山梨酯溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀，过滤，作为供试品溶液[6-7]。

1.2.1.2 对照溶液

精密量取供试品适量，用流动相定量稀释制成每1 mL中约含单硝酸异山梨酯5 μg的溶液作为对照溶液。

1.2.2 测定法

试验操作：精密量取供试品溶液20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取单硝酸异山梨酯对照品适量，同法测定[8-10]。按外标法以峰面积计算。

计算公式：

式中：A样/A对---- 供试品/对照品溶液中单硝酸异山梨酯的峰面积；

W样/W对----供试品/对照品溶液的称样量，g；

D样/D对----供试品/对照品溶液的稀释倍数；

W平----平均片重，g；

规格----60 mg。

1.2.3 含量结果

含量方法学(1)验证结果见表3。

表3 含量方法学(1)验证结果

1.3 含量方法学建立

1.3.1 色谱条件的选择

参照文献[16]单硝酸异山梨酯片的含量测定，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水(25∶75)为流动相；检测波长为210 nm；柱温为35 ℃。

1.3.2 干扰试验

取本品辅料适量，精密称定，加水溶解并定量稀释制成相当于每1 mL中约含单硝酸异山梨酯0.1 mg的溶液，分别精密量取此溶液、水、流动相20 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。

本品空白辅料、流动相、溶剂水在单硝酸异山梨酯峰附近无吸收峰，故本品辅料、流动相、溶剂水不干扰本品含量测定[11]。

1.3.3 线性试验与范围

取单硝酸异山梨酯原料0.025 5 g，置50 mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液，精密量取贮备液1、2、4、5、6、7.5 mL分别置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得[12]，分别取上述溶液20 μL注入液相色谱仪，照含量测定方法在210 nm波长处测定，记录色谱图。以浓度(μg/mL)对峰面积进行线性回归，结果见表4和图1。

表4 单硝酸异山梨酯测定的线性范围考察结果

试验表明，单硝酸异山梨酯在20.40～153.00 μg/mL浓度范围内，线性关系良好。

图1 单硝酸异山梨酯线性关系

1.3.4 准确度试验

1.3.4.1 对照品溶液的制备

精密称定单硝酸异山梨酯对照品25 mg，置50 mL量瓶中，加水振摇使之溶解后，再用水稀释至刻度，摇匀，精密量取溶液5 mL置25 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液[13-14]。

1.3.4.2 样品溶液的制备

分别取单硝酸异山梨酯原料20、25、30 mg，精密称定，置250 mL量瓶中，再按处方加相应辅料，加水约200 mL，振摇20 min，使单硝酸异山梨酯溶解，用水稀释至刻度，使溶液中含主药为处方量的80%、100%、120%，过滤，摇匀，即得样品溶液(1)、 (2) 、(3)，每个浓度平行制备3份样品溶液，按照含量测定方法在210 nm的波长处测定峰面积，计算样品的回收率及其RSD%，测定结果见表5。

表5 回收率测定结果

由试验结果可知，本方法测定单硝酸异山梨酯缓释片的含量，平均回收率为99.88%，RSD为0.54%，且回收率均在98.0%～102.0%范围内，本方法测定单硝酸异山梨酯准确度良好。

1.3.5 重复性试验

取本品细粉适量(约为单硝酸异山梨酯25 mg)，精密称定6份样品，分别置250 mL容量瓶中，加水约200 mL，振摇使之溶解，再用水稀释至刻度，摇匀，过滤，为样品溶液。另取单硝酸异山梨酯对照品适量，加水振摇至单硝酸异山梨酯溶解，用水稀释制成每1 mL中约含0.1 mg的溶液，摇匀，为对照品溶液[15-16]。分别精密量取6份对照品和样品溶液20 μL，依次注入液相色谱仪，记录色谱图。按照含量测定方法测定样品峰面积，计算其RSD%，见表6。

表6 重复性测定结果

由试验结果可知，此方法测定本品含量时重复性良好。

2 结 语

由上述试验可知，对本含量测定方法进行的线性、精密度、重复性、溶液稳定性、回收率等验证,试验结果均符合药品质量标准分析方法验证指导原则(文献[16]附录XIXA)的要求，表明此含量测定方法精密度好，准确度高，适用于本品的含量测定。