周锋 褚雪峰 史发兰

【摘要】 目的 探讨DNA损伤蒽环类药物诱导MDM2产生剪切体的表达。方法 采用多种DNA损伤药物处理原代胚胎成纤维细胞后， 分别利用实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-Time PCR）和逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测MDM2的剪接体表达， 进一步通过测序分析剪切体的序列。结果 蒽环类药物可以诱导MDM2的第10号和第11号外显子中间插入108 bp的片段， 并且该片段中含有终止密码子， 促使丢失第11号和第12号外显子。羟基脲（Hu）和5-氟尿嘧啶（5-Fu）并不能诱导MDM2剪接体的产生。结论 蒽环类药物可以诱导MDM2剪切体的表达。

【关键词】 蒽环类药物；MDM2；剪接体实时荧光定量聚合酶链式反应

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2018.35.113

【Abstract】 Objective To discuss the expression of DNA damage anthracyclines induced MDM2 spliceosome. Methods After treatment of primary embryonic fibroblasts with various DNA-damaging drugs， the expression of splicesome of MDM2 was detected by real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction （Real-Time PCR） and reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）， respectively， and the sequence of the splicing was further analyzed by sequencing. Results Anthracyclines can induce the insertion of 108 bp fragment between exons 10 and 11 of MDM2， and the fragment contains termination codon， which leads to the loss of exons 11 and 12. hydroxyurea （Hu） and 5-fluorouracil （Fu） could not induce the production of MDM2 splice. Conclusion Anthracyclines can induce the expression of MDM2 spliceosome.

【Key words】 Anthracyclines； MDM2； Spliceosome

MDM2是一个含有双微体的蛋白， 在细胞内主要作用参与调控真核细胞的生长、程序化死亡和DNA损伤的修复等[1-4]。MDM2位于人类染色体12q13-14上， 由12个外显子编码491个氨基酸[5]。MDM2的表达在人体正常多个组织和器官中， 骨骼肌中表达最高， 其次为肝、肺等， 与细胞的基本生理活动有关[6， 7]。此外， 在人类许多肿瘤中， 如肺癌、乳腺癌及结肠癌中， 都可以检测到MDM2基因的扩增表达[8-10]。MDM2具有多种功能， 研究最广泛的是其具有E3泛素连接酶活性[11， 12]。在癌症中其主要功能是降解抑癌基因P53， 促进肿瘤的形成[13]。但是突变或者过表达的P53也可以负反馈调节抑制MDM2的表达， 使其在癌症中失去功能。MDM2主要的功能区域分成2个。第一个重要结构域是1～241位氨基酸， 主要功能是结合P53， 使P53调控细胞周期G1期的功能丧失同时调控细胞凋亡的功能失去。这个区域同时还可以结合P73和E2F1蛋白。……