黄国裕，林瑶，林佳浩，陈旭旭，李军建，朱冠保

（1.温州医科大学附属第一医院 胃肠外科，浙江 温州 325015；2.温州医科大学 第一临床医学院，浙江温州 325035；3.温州医科大学附属第一医院 肝胆外科，浙江 温州 325015）

Sirtuins（SIRT）家族（SIRT 1-7）是一类依赖于NAD+-的乙酰化酶、脱乙酰酶和ADP-核糖转移酶家族，它们在基因组稳定性、能量代谢以及衰老等方面发挥着重要作用[1]。几乎所有的SIRT家族成员都被认为在肿瘤的发展中起着关键的作用[2]。SIRT4位于线粒体是NAD+-依赖的ADP核糖转移酶，它能抑制谷氨酰胺脱氢酶的活性[3]。研究表明，SIRT4可以通过抑制谷氨酰胺代谢从而具有抑癌基因的作用[4-5]。研究还发现SIRT4在结肠癌和食管癌中的表达降低与肿瘤的不良预后相关[6-8]。本课题组前期通过对胃癌组织芯片进行免疫组织化学实验发现，SIRT4的蛋白水平在胃癌组织中降低，并与更差的病理分级、T分期以及UICC分期相关[9]。然而，SIRT4对胃癌细胞的作用目前仍不清楚。本研究探讨过表达SIRT4对胃癌细胞SGC-7901和MNK45的体外增殖及周期的影响，以进一步明确SIRT4与胃癌的关系。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 载体和病毒产生：SIRT4慢病毒载体购自上海汉恒生物公司。表达SIRT4的载体为pHBLVCMVIE-ZsGreen-T2A-Puro。过表达慢病毒和阴性对照病毒的最终病毒滴度为2×108PFU/mL。

1.1.2 细胞系：人胃癌细胞系SGC-7901和MNK45购自中国科学院上海细胞生物学研究所。

1.1.3 主要试剂：胎牛血清、DMEM培养基、DMEM高糖培养基、青霉素和链霉素购自美国Gibco公司；PI/Nase购自美国BD公司；RIPA缓冲液等免疫印迹试剂购自上海碧云天公司。抗体：兔抗人多克隆抗体（HPA029691，SIRT4）购自美国Sigma公司……