陈 媛, 郑庆礼, 李春燕, 袁晓琴, 王全溪

(福建农林大学动物科学院, 福建 福州 350002)

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的猪的一种高度接触性肠道传染病，以呕吐、腹泻和食欲下降为主要特征[1].PEDV首次在英国被发现[2],而后在泰国、越南南部、菲律宾、中国等亚洲国家也报道了许多有关PEDV的流行情况.

PEDV的核酸为单股正链RNA，基因组全长为27000～33000个NT，其5′端存在一个帽子结构，3′端则有一个Poly(A)尾[3]，在3′4 kb区域内有4个主要的开放阅读框(ORF)，其中N、sM、以及M等结构蛋白主要由上游ORF3编码，M蛋白是一个可以在病毒粒子的组装和出芽、刺激机体产生免疫、诱导机体产生α-干扰素甚至可以中和病毒(前提是有补体存在)等方面发挥作用且具有高度保守性一种跨膜蛋白，因此把M蛋白列为PEDV基因工程疫苗的候选基因[4].S蛋白是一种糖蛋白，它位于病毒的表面，有识别靶细胞，促进病毒和细胞膜的融合，刺激宿主细胞产生中和抗体等作用，而且，它与病毒在体外的生长有关，能减弱病毒在体外的毒力,在疫苗的领域成为主要目的蛋白用于防治PEDV的爆发.

目前国内外对于单基因和多基因共表达的研究均取得一定进展，如张博等[5]成功构建了PEDV部分N基因原核表达载体，常宏赏等[7]成功构建了pet-32a-S质粒，崔光亚[7]成功构建了串联重组质粒pET-HBHA-HSP65，王国卿等[8]成功构建了PET-32a(+)-2Tβ4，但目前对PEDV的多基因共表达研究仍未见详细报导.

本试验旨在通过构建串联重组质粒，筛选诱导表达的条件，为后期获得重组蛋白、新型疫苗、多……