★ 王学军 吕艳 支勇 曹式丽（天津中医药大学第一附属医院肾病科 天津 300193）

1 材料

1.1 实验动物 远交系健康雄性Balb/c小鼠（8周龄），SPF级，由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供（许可证号：SCXK京2016-0002），其中MMP-9基因敲除小鼠由上海吉凯基因公司制备。

1.2 实验试剂 阳离子化牛血清白蛋白（Chondrex公司）；弗氏不完全佐剂（Sigma公司）；MMP-9（武汉博士德生物工程有限公司）；TNF-α（尚柏生物医学技术北京公司）。

1.3 实验药物 肾络宁：由柴胡、黄芩、生黄芪、当归、女贞子、泽兰、水蛭、细辛等组成，方药经煎煮浓缩成100mL汁液（含生药1.05g/mL）。药物购自天津中医药大学第一附属医院中药房，加工由天津中医药大学药厂协助完成。

2 方法

2.1 动物分组 实验小鼠共40只适应性饲养1周后，按体重分层随机分为MMP-9基因敲除组、肾络宁组、模型组各10只，各组均制备膜性肾病模型，余下10只作为空白对照组。实验全程给予普通饲料喂养，自由进水。

2.2 模型复制 参考有关文献复制采用阳离子化牛血清白蛋白（C-BSA）制备heymann膜性肾病小鼠模型［4］。预免疫：C-BSA 1mg，加入 0.5mL PBS中，再同等量的弗氏不完全佐剂混匀配制成乳白色悬浊液，在小鼠双侧腋下、腹股沟作多点皮下注射进行预免疫。正式免疫：预免疫1周后，每只小鼠尾静脉注射C-BSA 2.5mg（溶于lml pH值为7.4的PBS中），每周2次，共2周。

2.3 给药方法 基因敲除组、肾络宁组，自造模第1天起灌服肾络宁（13.65g/kg）；模型组、对照组以等量生理盐水灌胃。实验共进行6周。

2.4 检测指标与方法 于给药后0周、第6周末检测尿蛋白浓度；于给药第0周自小鼠眶后静脉窦取血，第6周末小鼠股动脉取血，离心血清，进行MMP-9、TNF-α的检测。……