祁旻龙， 朱 良， Yuri Ciervo， 徐 俊

(1. 同济大学医学院，上海 200092； 2. 英国谢菲尔德大学转化神经科学研究所，谢菲尔德S10 2HQ，英国)

皮肤是最大的人体器官，对于保护机体至关重要，各种因素造成的皮肤损伤难以愈合、愈合速度慢或创伤后发生瘢痕，给患者带来极大痛苦。近年来，随着干细胞技术的发展，一种脂肪间充质干细胞(adipose mesenchymal stem cells，ADSCs)因取材方便、免疫原性低等优点，用于皮肤损伤的治疗而受到越来越多的关注[2-3]。研究表明，人类ADSCs参与调节炎症过程促进创面愈合，但由于先天缺乏趋化因子受体2(chemokine receptor 2，CCR2)，其靶向性受到影响。本研究通过慢病毒技术构建过表达CCR2的ADSCs，皮下移植入小鼠皮肤创面以观察其对皮肤创面愈合的影响，为创伤修复的基础研究和临床应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 实验材料

人皮下脂肪组织样本由同济大学附属第十人民医院妇产科提供，均来自健康成人腹部抽脂手术脂肪(征得患者及家属同意并签署知情同意书)，整个实验过程均符合同济大学附属第十人民医院伦理委员会要求。质粒LV-mCCR2-IRES-ZsGreen1为实验室自有。雌性ICR小鼠30只，体质量25～30g，由同济大学实验动物中心提供。DMEM/F12培养基和胎牛血清(FBS，美国Hy-clone公司)，抗体CD73、CD105、CD44和CD31(美国BD公司)，ADSCs成脂、骨、软骨分化试剂盒(加拿大STEMCELL公司)，其他常规试剂购自同济大学后勤物资中心。

1.2 实验方法

1.2.1 脂肪干细胞的分离和培养 新鲜的脂肪标本用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次，于无菌操作台上用无菌剪刀剪碎，加入等体积0.2%胶原酶I，置于37℃的水浴锅中消化1.5h。加入等体积的培养基终止消化，离心半径26cm，1500r/min，离心5min。……