王绪海，蒋 松，李 鑫，张永生，李超程，营瑞文，贾 斌

(新疆石河子大学动物科技学院，新疆 石河子 832003)

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

试验哈萨克羊：选择规模化哈萨克羊场——新疆第九师165团羊场，提供300只哈萨克羊，佩戴耳号，颈静脉采血于肝素钠抗凝管，按照要求提取基因组DNA，设计MHC-DBR1基因第二外显子引物，PCR扩增，PCR产物分别用MvaⅠ，SacⅡ，Hin1 Ⅰ三个内切酶切割，酶切产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，进行MHC-DRB1：MvaⅠbc-SacⅡ ab-Hin1 Ⅰ ab抗包虫病单倍型分析；同时经过B超和深圳康百得ELISA免疫试剂盒检测确认未感染包虫病，购买7只健康的绵羊，其中用于人工感染试验的绵羊6只(抗性组和非抗性组各3只)，以及非抗性对照绵羊1只。MHC抗性组绵羊(KSP-AI)记为A组，MHC非抗性组绵羊(KSN-AI)记为B组，对照组绵羊(KSN-UAI)记为C组。购买饲养于大学动物养殖实验房，再人工攻虫感染试验。

试验犬：从新疆生产建设兵团第八师牧区团场购买哈萨克牧羊犬5只，购买后饲养于石河子大学动物科技学院动物试验站隔离犬舍。

经过检测确定为绵羊包虫病的病变肝、肺20个，均由乌鲁木齐屠宰场和新疆第八师石河子市兽医卫生监督所提供。

1.1.2 试剂与仪器

1.1.2.1 试剂

试验检测包虫病和其他常规所需的试剂：绵羊包虫病ELISA诊断试剂盒(深圳康百得公司)；B超耦合剂、十二烷基硫酸钠(SDS)、Tris饱和酚、无水乙醇、氯仿、异戊醇(石河子北生物商贸有限公司)；溴酚(蓝天津市鲁鑫化工科技有限公司)；柠檬酸钠、柠檬酸、葡萄糖、EDTA(石河子联华商贸有限公司)；DNA Marker DL2000、DNA Marker DL500、Taq酶、限制性内切酶MvaI、SacII、Hin1I、HaeIII(宝生物有限公司)；琼脂糖Merck(西班牙)；……