张 憬，梁 斌，吴志奇，祝秀梅，戴海洁，南玉琴

（甘肃省兽药饲料监察所，甘肃兰州 730030）

水溶性维生素对于畜禽养殖是重要的营养成分，其可参与蛋白质、脂肪等的代谢，能够提高免疫能力、预防疾病等。目前对于多种维生素的同步检测都是高效液相色谱法，但是所用提取液、流动相、采集波长千差万别。为验证并找到一个理想的检测方法，节约时间成本，本实验选择了常见的六种B族维生素：烟酸、烟酰胺、叶酸、硫胺（维生素 B1）、核黄素（维生素 B2）、盐酸吡哆醇（维生素B6），比较不同波长、不同色谱柱温、不同提取方法，以获得最佳检测条件。

1 材料与方法

1.1 提取液 在已装入700 mL去离子水的1000 mL容量瓶中，加入50 mg EDTA，振摇溶解后再加入25 mL冰乙酸、5 mL三乙胺，用去离子水定容摇匀。

1.2 流动相 流动相A：在已装入700 mL去离子水的1000 mL容量瓶中，加入50 mg EDTA、1.1 g庚烷磺酸钠，振摇溶解后再加入25 mL冰乙酸、5 mL三乙胺，用去离子水定容摇匀。用冰乙酸、三乙胺调节pH值至3.40，过0.45μm滤膜，超声脱气，待用。

流动相B：甲醇，色谱纯。

流动相 A：流动相 B=91∶9。

1.3 标准溶液

1.3.1 烟酸贮备液 准确称取标准品0.0250 g于25 mL棕色容量瓶，用去离子水溶解定容，此溶液浓度为 1000μg/mL。

1.3.2 烟酰胺贮备液 准确称取标准品0.0250 g于25 mL棕色容量瓶，用去离子水溶解定容，此溶液浓度为 1000μg/mL。

1.3.3 叶酸贮备液 准确称取标准品0.0500 g于50 mL棕色容量瓶，加入40 mL去离子水振摇，滴加0.25 mol/L氢氧化钠，用最少量使叶酸溶解（因叶酸水溶性差，用氢氧化钠将叶酸转化为叶酸盐），用去离子水溶解定容，此溶液浓度为1000μg/mL。

1.3.4 维生素B1贮备液 准确称取标准品0.0250 g于25 mL棕色容量瓶，用25%乙醇溶液溶解定容，此溶液浓度为1000μg/mL。……