熊益群 梁越进 徐文军 刘心亮 穆桂萍 徐绍刚 刘文赫 袁东凯 王静娜

1.广州中医药大学附属深圳市中医院中医药研究所 (广东 深圳, 518033) 2.美国德克萨斯大学医学分校免疫实验室 3.广州中医药大学硕士研究生班

病毒性肝炎是我国临床常见的传染性疾病，与肝硬化和肝细胞癌的发生密切相关，发病机制与病毒感染、免疫调节紊乱有关。而调控免疫，达到控制病情、延缓疾病进展，与抑制肝炎病毒的复制同为目前的重要治疗手段。为此，我们对临床验方补益凉解法方进行了相关实验研究，以探讨其免疫调节作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 实验动物、药物和试剂

1.1.1 实验动物 C57BL/6 (B6)小鼠，SPF级，6～8 周龄，雌性，体重20～25g。

1.1.2 主要试剂：IL-33 ELISA试剂盒、sST2-ELISA试剂盒、淋巴细胞分离液、红细胞裂解液、胰蛋白酶、胎牛血清、DMEM培养基、二甲基亚砜、重组IL-33、磷酸盐缓冲液(PBS)等。

1.1.3 主要仪器 CO2培养箱、超净工作台、OLYMPUS倒置显微镜、荧光显微镜、流式细胞仪、自动平衡离心机、化学发光免疫分析仪、荧光定量PCR仪、多功能酶标仪、BI0-PLEX平台等。

1.1.4 药物 补益凉解方：生地、丹皮、山茱萸、女贞子、桑寄生、仙茅、五味子、黄芪、白术、川萆薢、川朴、叶下珠。水煎醇提制成,含生药量2g/ml,冷藏备用(深圳市中医院制剂室制备)。

1.2 实验方法

1.2.1 造模、分组与用药 根据治疗方案将小鼠随机分成6组：空白组、模型组、补益凉解方大、中、小剂量组，以及IL-33组。除空白组外，其余各组小鼠均行腺病毒3×109PFU(AdLacZ)尾静脉注入以建立小鼠急性肝炎模型，空白组小鼠尾静脉注射等容积生理盐水。用药(IL-33和补益凉解方)前，对小鼠血清AdLacZ病毒量、ALT、AST、IL-33、sST2进行检测。……